热带作物学报
熱帶作物學報
열대작물학보
Chinese Journal of Tropical Crops
2015年
8期
1445-1450
,共6页
胡丽松%邬华松%郝朝运%谭乐和%范睿%吴刚
鬍麗鬆%鄔華鬆%郝朝運%譚樂和%範睿%吳剛
호려송%오화송%학조운%담악화%범예%오강
Gateway技术%载体改造%胡椒PnHMGB%原核表达
Gateway技術%載體改造%鬍椒PnHMGB%原覈錶達
Gateway기술%재체개조%호초PnHMGB%원핵표체
Gateway technology%Vector modification%PnHMGB%Prokaryotic expression
质粒载体是基因工程研究中不可或缺的工具.为提高载体构建效率,进一步满足基因工程研究在构建表达载体时的需要,本文提供了一种重组型载体的改造策略.基本流程如下:利用带Bgl Ⅱ、Xho Ⅰ酶切位点以及attB重组序列的引物,从Gateway的入门载体pDONR Zeo中克隆到“Bgl Ⅱ-attB 1-ccdB-attB2-Xho Ⅰ”片段.通过酶切连接的方法,将该片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1以及pET-28a的多克隆位点,构建具有重组位点以及ccdB致死基因的原核表达载体.以胡椒High mobility group protein(HMGB)基因的开放读码框为目标片段,通过重组反应将目的基因构建到改造后的原核表达载体上,经检测体外诱导表达出大小正确的HMGB蛋白,验证本研究中改造载体的正确性.该载体的成功构建,为基因工程科研工作提供了一个高效的蛋白表达载体以及载体改造的新策略.
質粒載體是基因工程研究中不可或缺的工具.為提高載體構建效率,進一步滿足基因工程研究在構建錶達載體時的需要,本文提供瞭一種重組型載體的改造策略.基本流程如下:利用帶Bgl Ⅱ、Xho Ⅰ酶切位點以及attB重組序列的引物,從Gateway的入門載體pDONR Zeo中剋隆到“Bgl Ⅱ-attB 1-ccdB-attB2-Xho Ⅰ”片段.通過酶切連接的方法,將該片段插入到原覈錶達載體pGEX-4T-1以及pET-28a的多剋隆位點,構建具有重組位點以及ccdB緻死基因的原覈錶達載體.以鬍椒High mobility group protein(HMGB)基因的開放讀碼框為目標片段,通過重組反應將目的基因構建到改造後的原覈錶達載體上,經檢測體外誘導錶達齣大小正確的HMGB蛋白,驗證本研究中改造載體的正確性.該載體的成功構建,為基因工程科研工作提供瞭一箇高效的蛋白錶達載體以及載體改造的新策略.
질립재체시기인공정연구중불가혹결적공구.위제고재체구건효솔,진일보만족기인공정연구재구건표체재체시적수요,본문제공료일충중조형재체적개조책략.기본류정여하:이용대Bgl Ⅱ、Xho Ⅰ매절위점이급attB중조서렬적인물,종Gateway적입문재체pDONR Zeo중극륭도“Bgl Ⅱ-attB 1-ccdB-attB2-Xho Ⅰ”편단.통과매절련접적방법,장해편단삽입도원핵표체재체pGEX-4T-1이급pET-28a적다극륭위점,구건구유중조위점이급ccdB치사기인적원핵표체재체.이호초High mobility group protein(HMGB)기인적개방독마광위목표편단,통과중조반응장목적기인구건도개조후적원핵표체재체상,경검측체외유도표체출대소정학적HMGB단백,험증본연구중개조재체적정학성.해재체적성공구건,위기인공정과연공작제공료일개고효적단백표체재체이급재체개조적신책략.
