成都医学院学报
成都醫學院學報
성도의학원학보
Journal of Chengdu Medical College
2015年
4期
393-396,409
,共5页
薛峰%王伯庆%尹继炜%易超
薛峰%王伯慶%尹繼煒%易超
설봉%왕백경%윤계위%역초
肝再生增强因子%慢病毒表达载体%BLR 3A大鼠肝细胞%基因重组技术
肝再生增彊因子%慢病毒錶達載體%BLR 3A大鼠肝細胞%基因重組技術
간재생증강인자%만병독표체재체%BLR 3A대서간세포%기인중조기술
Augment of liver regeneration%Lentivirus expression vector%BLR 3A rat hepatic cell%Gene recombination technology
目的 构建携带人肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)基因的慢病毒表达载体,并验证其安全性与有效性.方法 将以人胎肝cDNA为模板扩增得到的ALR与pLenti6/V5-D-TOPO重组慢病毒载体连接后,与慢病毒包装体系ViraPowerTM Packaging Mix共转染293T细胞,得到携带人ALR基因的慢病毒表达载体病毒颗粒,实时定量PCR法测定病毒滴度;转染BLR 3A大鼠肝细胞,观察细胞生长情况,并用RT-PCR法测定ALR基因表达的方法,验证构建的慢病毒载体的安全性与有效性.结果 扩增产物凝胶电泳、提抽质粒酶切电泳及基因测序结果均显示成功构建携带ALR基因的慢病毒表达载体,测得其病毒滴度为1.48×107 v.p./mL.转染BLR 3A大鼠肝细胞72 h后,仅少量细胞病变脱离,转染率为88.49％;RT-PCR结果显示,构建的携带ALR慢病毒表达载体可诱导BLR 3A大鼠肝细胞表达ALR基因.结论 慢病毒表达载体是一种兼具有效性与安全性,且适用于基因研究的病毒表达载体.
目的 構建攜帶人肝再生增彊因子(augmenter of liver regeneration,ALR)基因的慢病毒錶達載體,併驗證其安全性與有效性.方法 將以人胎肝cDNA為模闆擴增得到的ALR與pLenti6/V5-D-TOPO重組慢病毒載體連接後,與慢病毒包裝體繫ViraPowerTM Packaging Mix共轉染293T細胞,得到攜帶人ALR基因的慢病毒錶達載體病毒顆粒,實時定量PCR法測定病毒滴度;轉染BLR 3A大鼠肝細胞,觀察細胞生長情況,併用RT-PCR法測定ALR基因錶達的方法,驗證構建的慢病毒載體的安全性與有效性.結果 擴增產物凝膠電泳、提抽質粒酶切電泳及基因測序結果均顯示成功構建攜帶ALR基因的慢病毒錶達載體,測得其病毒滴度為1.48×107 v.p./mL.轉染BLR 3A大鼠肝細胞72 h後,僅少量細胞病變脫離,轉染率為88.49％;RT-PCR結果顯示,構建的攜帶ALR慢病毒錶達載體可誘導BLR 3A大鼠肝細胞錶達ALR基因.結論 慢病毒錶達載體是一種兼具有效性與安全性,且適用于基因研究的病毒錶達載體.
목적 구건휴대인간재생증강인자(augmenter of liver regeneration,ALR)기인적만병독표체재체,병험증기안전성여유효성.방법 장이인태간cDNA위모판확증득도적ALR여pLenti6/V5-D-TOPO중조만병독재체련접후,여만병독포장체계ViraPowerTM Packaging Mix공전염293T세포,득도휴대인ALR기인적만병독표체재체병독과립,실시정량PCR법측정병독적도;전염BLR 3A대서간세포,관찰세포생장정황,병용RT-PCR법측정ALR기인표체적방법,험증구건적만병독재체적안전성여유효성.결과 확증산물응효전영、제추질립매절전영급기인측서결과균현시성공구건휴대ALR기인적만병독표체재체,측득기병독적도위1.48×107 v.p./mL.전염BLR 3A대서간세포72 h후,부소량세포병변탈리,전염솔위88.49％;RT-PCR결과현시,구건적휴대ALR만병독표체재체가유도BLR 3A대서간세포표체ALR기인.결론 만병독표체재체시일충겸구유효성여안전성,차괄용우기인연구적병독표체재체.
