分析化学
分析化學
분석화학
Chinese Journal of Analytical Chemistry
2015年
8期
1125-1129
,共5页
翟琨%向东山%朱俊%胡红青
翟琨%嚮東山%硃俊%鬍紅青
적곤%향동산%주준%호홍청
汞%分子信标%核酸染料SYBR Green Ⅰ%定量检测%土壤
汞%分子信標%覈痠染料SYBR Green Ⅰ%定量檢測%土壤
홍%분자신표%핵산염료SYBR Green Ⅰ%정량검측%토양
Mercury%Molecular beacon%Nucleic acid dye SYBR Green Ⅰ%Quantitative detection%Soil
利用分子信标、单链核酸(ssDNA)及核酸染料SYBR Green Ⅰ,通过同步荧光分析法,建立了一种高灵敏、高选择性土壤汞(Hg2+)的定量检测方法.在该体系中,分子信标的荧光基团设计为荧光胺(FAM),分子信标的环设计为与ssDNA互补,但有4个T碱基错配的序列.在Hg2+存在时,分子信标的环与ssDNA通过“T-Hg2+-T”特异性结合形成双链DNA,分子信标的茎被打开,荧光基团与猝灭基团分开,荧光恢复;同时,核酸染料SYBR Green Ⅰ与双链DNA作用,SYBR Green Ⅰ的荧光信号显著增强.SYBR Green Ⅰ与FAM的最大激发波长与最大发射波长都很接近,通过同步荧光分析法检测时,两种荧光染料的荧光峰重叠,荧光信号增强,可实现Hg2+的高灵敏检测.体系的最优检测条件为:缓冲溶液的pH=8.0,孵育温度为50℃,孵育4 min,缓冲溶液中NaCl的浓度为30 mmol/L,SYBR Green Ⅰ工作液的体积为100 μL.在优化条件下,Hg2+浓度在5×10-10~4.0×104 mol/L时,SYBR Green Ⅰ及FAM总的荧光强度(△I,为体系在存在和不存在Hg2+时的荧光强度之差)与Hg2+浓度(C)间有良好的线性关系,其拟合的回归方程为△I=1.3949C+ 19.3596(R2=0.9976),方法检出限(3σ)为3×10-10 mol/L.本方法操作简单、快速、选择性好、灵敏度高、重复性好.
利用分子信標、單鏈覈痠(ssDNA)及覈痠染料SYBR Green Ⅰ,通過同步熒光分析法,建立瞭一種高靈敏、高選擇性土壤汞(Hg2+)的定量檢測方法.在該體繫中,分子信標的熒光基糰設計為熒光胺(FAM),分子信標的環設計為與ssDNA互補,但有4箇T堿基錯配的序列.在Hg2+存在時,分子信標的環與ssDNA通過“T-Hg2+-T”特異性結閤形成雙鏈DNA,分子信標的莖被打開,熒光基糰與猝滅基糰分開,熒光恢複;同時,覈痠染料SYBR Green Ⅰ與雙鏈DNA作用,SYBR Green Ⅰ的熒光信號顯著增彊.SYBR Green Ⅰ與FAM的最大激髮波長與最大髮射波長都很接近,通過同步熒光分析法檢測時,兩種熒光染料的熒光峰重疊,熒光信號增彊,可實現Hg2+的高靈敏檢測.體繫的最優檢測條件為:緩遲溶液的pH=8.0,孵育溫度為50℃,孵育4 min,緩遲溶液中NaCl的濃度為30 mmol/L,SYBR Green Ⅰ工作液的體積為100 μL.在優化條件下,Hg2+濃度在5×10-10~4.0×104 mol/L時,SYBR Green Ⅰ及FAM總的熒光彊度(△I,為體繫在存在和不存在Hg2+時的熒光彊度之差)與Hg2+濃度(C)間有良好的線性關繫,其擬閤的迴歸方程為△I=1.3949C+ 19.3596(R2=0.9976),方法檢齣限(3σ)為3×10-10 mol/L.本方法操作簡單、快速、選擇性好、靈敏度高、重複性好.
이용분자신표、단련핵산(ssDNA)급핵산염료SYBR Green Ⅰ,통과동보형광분석법,건립료일충고령민、고선택성토양홍(Hg2+)적정량검측방법.재해체계중,분자신표적형광기단설계위형광알(FAM),분자신표적배설계위여ssDNA호보,단유4개T감기착배적서렬.재Hg2+존재시,분자신표적배여ssDNA통과“T-Hg2+-T”특이성결합형성쌍련DNA,분자신표적경피타개,형광기단여졸멸기단분개,형광회복;동시,핵산염료SYBR Green Ⅰ여쌍련DNA작용,SYBR Green Ⅰ적형광신호현저증강.SYBR Green Ⅰ여FAM적최대격발파장여최대발사파장도흔접근,통과동보형광분석법검측시,량충형광염료적형광봉중첩,형광신호증강,가실현Hg2+적고령민검측.체계적최우검측조건위:완충용액적pH=8.0,부육온도위50℃,부육4 min,완충용액중NaCl적농도위30 mmol/L,SYBR Green Ⅰ공작액적체적위100 μL.재우화조건하,Hg2+농도재5×10-10~4.0×104 mol/L시,SYBR Green Ⅰ급FAM총적형광강도(△I,위체계재존재화불존재Hg2+시적형광강도지차)여Hg2+농도(C)간유량호적선성관계,기의합적회귀방정위△I=1.3949C+ 19.3596(R2=0.9976),방법검출한(3σ)위3×10-10 mol/L.본방법조작간단、쾌속、선택성호、령민도고、중복성호.