中华血液学杂志
中華血液學雜誌
중화혈액학잡지
Chinese Journal of Hematology
2015年
9期
780-784
,共5页
傅云峰%张亚男%张帆%刘竞%桂嵘
傅雲峰%張亞男%張帆%劉競%桂嶸
부운봉%장아남%장범%류경%계영
雷帕霉素%多发性骨髓瘤%细胞凋亡%mTORC2信号通路%HSP90热休克蛋白质类抑制剂
雷帕黴素%多髮性骨髓瘤%細胞凋亡%mTORC2信號通路%HSP90熱休剋蛋白質類抑製劑
뢰파매소%다발성골수류%세포조망%mTORC2신호통로%HSP90열휴극단백질류억제제
Rapamycin%Multiple myeloma%Apoptosis%mTORC2%HSP90 heat-shock proteins inhibitors
目的 探讨共同抑制mTORC2信号通路和热休克蛋白90对多发性骨髓瘤(MM)细胞AKT蛋白表达及细胞凋亡的影响.方法 采用雷帕霉素(20 nmol/L)、17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔德霉素(17-AAG) (600 nmol/L)分别及两药联合处理MM细胞株U266、KM3细胞0、8、24、48 h,MTT法检测其对细胞增殖的影响;流式细胞术检测其对细胞凋亡及细胞周期的影响;Western blot法检测其对p-AKT(ser473)、p-AKT(thr450)、p-S6 (S235/236)及AKT蛋白表达的影响.结果 与空白对照组比较,雷帕霉素、17-AAG分别及两药联合后均可抑制U266、KM3细胞增殖,尤以联用后抑制作用最为明显(P值均＜0.05);均可使细胞周期阻滞在G1期,尤其在作用48 h时周期阻滞最明显(P值均＜0.01);处理48 h后空白对照组、雷帕霉素组、17-AAG组、两药联用组KM3细胞的凋亡率分别为(12.21±0.89)％、(18.88±1.83)％、(21.04+0.60)％、(60.07±2.13)％,U266细胞的凋亡率分别为(8.72±0.15)％、(16.45±0.65)％、(17.14±0.59)％、(54.25±1.76)％,与空白对照组比较差异均有统计学意义,两药联用组促凋亡作用更为明显(P值均＜0.01).雷帕霉素作用48 h后可抑制mTORC2信号通路;单用雷帕霉素或17-AAG时可降低AKT蛋白的表达,两药联用作用更为明显(P值均＜0.01).结论 共同抑制mTORC2和HSP90活性可降低AKT蛋白的表达,在体外可明显促进MM细胞株U266、KM3细胞的凋亡.
目的 探討共同抑製mTORC2信號通路和熱休剋蛋白90對多髮性骨髓瘤(MM)細胞AKT蛋白錶達及細胞凋亡的影響.方法 採用雷帕黴素(20 nmol/L)、17-烯丙胺-17-脫甲氧格爾德黴素(17-AAG) (600 nmol/L)分彆及兩藥聯閤處理MM細胞株U266、KM3細胞0、8、24、48 h,MTT法檢測其對細胞增殖的影響;流式細胞術檢測其對細胞凋亡及細胞週期的影響;Western blot法檢測其對p-AKT(ser473)、p-AKT(thr450)、p-S6 (S235/236)及AKT蛋白錶達的影響.結果 與空白對照組比較,雷帕黴素、17-AAG分彆及兩藥聯閤後均可抑製U266、KM3細胞增殖,尤以聯用後抑製作用最為明顯(P值均＜0.05);均可使細胞週期阻滯在G1期,尤其在作用48 h時週期阻滯最明顯(P值均＜0.01);處理48 h後空白對照組、雷帕黴素組、17-AAG組、兩藥聯用組KM3細胞的凋亡率分彆為(12.21±0.89)％、(18.88±1.83)％、(21.04+0.60)％、(60.07±2.13)％,U266細胞的凋亡率分彆為(8.72±0.15)％、(16.45±0.65)％、(17.14±0.59)％、(54.25±1.76)％,與空白對照組比較差異均有統計學意義,兩藥聯用組促凋亡作用更為明顯(P值均＜0.01).雷帕黴素作用48 h後可抑製mTORC2信號通路;單用雷帕黴素或17-AAG時可降低AKT蛋白的錶達,兩藥聯用作用更為明顯(P值均＜0.01).結論 共同抑製mTORC2和HSP90活性可降低AKT蛋白的錶達,在體外可明顯促進MM細胞株U266、KM3細胞的凋亡.
목적 탐토공동억제mTORC2신호통로화열휴극단백90대다발성골수류(MM)세포AKT단백표체급세포조망적영향.방법 채용뢰파매소(20 nmol/L)、17-희병알-17-탈갑양격이덕매소(17-AAG) (600 nmol/L)분별급량약연합처리MM세포주U266、KM3세포0、8、24、48 h,MTT법검측기대세포증식적영향;류식세포술검측기대세포조망급세포주기적영향;Western blot법검측기대p-AKT(ser473)、p-AKT(thr450)、p-S6 (S235/236)급AKT단백표체적영향.결과 여공백대조조비교,뢰파매소、17-AAG분별급량약연합후균가억제U266、KM3세포증식,우이련용후억제작용최위명현(P치균＜0.05);균가사세포주기조체재G1기,우기재작용48 h시주기조체최명현(P치균＜0.01);처리48 h후공백대조조、뢰파매소조、17-AAG조、량약련용조KM3세포적조망솔분별위(12.21±0.89)％、(18.88±1.83)％、(21.04+0.60)％、(60.07±2.13)％,U266세포적조망솔분별위(8.72±0.15)％、(16.45±0.65)％、(17.14±0.59)％、(54.25±1.76)％,여공백대조조비교차이균유통계학의의,량약련용조촉조망작용경위명현(P치균＜0.01).뢰파매소작용48 h후가억제mTORC2신호통로;단용뢰파매소혹17-AAG시가강저AKT단백적표체,량약련용작용경위명현(P치균＜0.01).결론 공동억제mTORC2화HSP90활성가강저AKT단백적표체,재체외가명현촉진MM세포주U266、KM3세포적조망.
Objective To explore apoptosis of multiple myeloma (MM) cells and its mechanism by the combined inhibition of mTORC2 signaling pathway and heat shock protein 90.Methods The effects of Rapamycin,17-AAG and the combination on proliferation of MM cell lines U266 and KM3 were assessed using MTT at different time points (0,8,24,48 hour).Cell apoptosis and cell cycle distribution were measured by flow cytometry.The specific proteins p-AKT(ser473),p-AKT(thr450),p-S6(S235/236) and AKT were detected by Western blotting.Results Rapamycin,17-AAG and the combination suppressed the proliferation of MM cell lines U266 and KM3,especially the combination of Rapamycin and 17-AAG synergistically inhibited the proliferation (P＜0.05);Rapamycin induced G1 arrest both at 24 and 48 hours,17-AAG also induced G1 arrest,especially at 48 hours (P＜0.01);Rapamycin,17-AAG alone decreased the expression of AKT and induced MM cell apoptosis to some extent (P＜0.01);Chronic rapamycin treatment inhibited mTORC2;Inhibition of both mTORC2 and chaperon pathways degraded AKT and induced MM cell apoptosis,which was significantly higher than that of any single agent (P＜0.01).Conclusion Inhibition of both mTORC2 and chaperon pathways decreased the expression of AKT to induce apoptosis of MM cells in vitro.
