广东医学
廣東醫學
엄동의학
Guangdong Medical Journal
2015年
15期
2342-2345
,共4页
刘振杰%张丹丹%李涛%徐宁%李曼%黄丽英
劉振傑%張丹丹%李濤%徐寧%李曼%黃麗英
류진걸%장단단%리도%서저%리만%황려영
RNA干扰%MMP-14%类风湿关节炎%成纤维滑膜细胞%炎症因子
RNA榦擾%MMP-14%類風濕關節炎%成纖維滑膜細胞%炎癥因子
RNA간우%MMP-14%류풍습관절염%성섬유활막세포%염증인자
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目的 探究能否通过RNA干扰(RNAi)沉默膜型基质蛋白酶-14(MMP-14)从而抑制类风湿关节炎患者的成纤维滑膜细胞(RA-FLS)炎症因子的分泌.方法 体外化学合成MMP-14序列特异性双链siRNA,与脂质体混合后转染RA-FLS,实验分为3组,MMP-14-siRNA组转染MMP-14特异性siRNA的RA-FLS,Notarget组转染MMP-14非特异性siRNA的RA-FLS,Control组为未经处理的RA-FLS.用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)检测相关基因转录水平,蛋白质免疫印迹法(western blot)检测MMP-14蛋白水平,Human IL-1β immunoassay检测试剂盒检测细胞炎症因子IL-1β分泌.结果 QRT-PCR结果显示,MMP-14-siRNA组细胞中MMP-14基因表达0.290±0.026,明显比No target组和Control组低(P<0.001),而No target组细胞的MMP-14基因表达0.984±0.016与Control组比较差异无统计学意义(P>0.05).RNAi抑制MMP-14基因转录后,MMP-14-siRNA组细胞MMP-14蛋白表达水平明显低于Control组和No target组.QRT-PCR结果显示MMP-14-siRNA组的炎症因子TNF、IL-1β基因转录水平明显降低,分别为Control组的73%和52%,而COX-2的表达差异无统计学意义(P>0.05).Human IL-1β immunoassay检测试剂盒检测结果进一步验证了MMP-14-siRNA组细胞向胞外释放的IL-1β显著减少,约为Control组的50%,而No target组与Control组差异无统计学意义(P>0.05).结论 使用RNA干扰技术可有效抑制RA-FLS炎症因子分泌,提示RNAi技术沉默MMP-14有可能缓解RA滑膜炎症.
目的 探究能否通過RNA榦擾(RNAi)沉默膜型基質蛋白酶-14(MMP-14)從而抑製類風濕關節炎患者的成纖維滑膜細胞(RA-FLS)炎癥因子的分泌.方法 體外化學閤成MMP-14序列特異性雙鏈siRNA,與脂質體混閤後轉染RA-FLS,實驗分為3組,MMP-14-siRNA組轉染MMP-14特異性siRNA的RA-FLS,Notarget組轉染MMP-14非特異性siRNA的RA-FLS,Control組為未經處理的RA-FLS.用實時熒光定量逆轉錄聚閤酶鏈反應(QRT-PCR)檢測相關基因轉錄水平,蛋白質免疫印跡法(western blot)檢測MMP-14蛋白水平,Human IL-1β immunoassay檢測試劑盒檢測細胞炎癥因子IL-1β分泌.結果 QRT-PCR結果顯示,MMP-14-siRNA組細胞中MMP-14基因錶達0.290±0.026,明顯比No target組和Control組低(P<0.001),而No target組細胞的MMP-14基因錶達0.984±0.016與Control組比較差異無統計學意義(P>0.05).RNAi抑製MMP-14基因轉錄後,MMP-14-siRNA組細胞MMP-14蛋白錶達水平明顯低于Control組和No target組.QRT-PCR結果顯示MMP-14-siRNA組的炎癥因子TNF、IL-1β基因轉錄水平明顯降低,分彆為Control組的73%和52%,而COX-2的錶達差異無統計學意義(P>0.05).Human IL-1β immunoassay檢測試劑盒檢測結果進一步驗證瞭MMP-14-siRNA組細胞嚮胞外釋放的IL-1β顯著減少,約為Control組的50%,而No target組與Control組差異無統計學意義(P>0.05).結論 使用RNA榦擾技術可有效抑製RA-FLS炎癥因子分泌,提示RNAi技術沉默MMP-14有可能緩解RA滑膜炎癥.
목적 탐구능부통과RNA간우(RNAi)침묵막형기질단백매-14(MMP-14)종이억제류풍습관절염환자적성섬유활막세포(RA-FLS)염증인자적분비.방법 체외화학합성MMP-14서렬특이성쌍련siRNA,여지질체혼합후전염RA-FLS,실험분위3조,MMP-14-siRNA조전염MMP-14특이성siRNA적RA-FLS,Notarget조전염MMP-14비특이성siRNA적RA-FLS,Control조위미경처리적RA-FLS.용실시형광정량역전록취합매련반응(QRT-PCR)검측상관기인전록수평,단백질면역인적법(western blot)검측MMP-14단백수평,Human IL-1β immunoassay검측시제합검측세포염증인자IL-1β분비.결과 QRT-PCR결과현시,MMP-14-siRNA조세포중MMP-14기인표체0.290±0.026,명현비No target조화Control조저(P<0.001),이No target조세포적MMP-14기인표체0.984±0.016여Control조비교차이무통계학의의(P>0.05).RNAi억제MMP-14기인전록후,MMP-14-siRNA조세포MMP-14단백표체수평명현저우Control조화No target조.QRT-PCR결과현시MMP-14-siRNA조적염증인자TNF、IL-1β기인전록수평명현강저,분별위Control조적73%화52%,이COX-2적표체차이무통계학의의(P>0.05).Human IL-1β immunoassay검측시제합검측결과진일보험증료MMP-14-siRNA조세포향포외석방적IL-1β현저감소,약위Control조적50%,이No target조여Control조차이무통계학의의(P>0.05).결론 사용RNA간우기술가유효억제RA-FLS염증인자분비,제시RNAi기술침묵MMP-14유가능완해RA활막염증.