肝脏
肝髒
간장
Chinese Hepatology
2015年
7期
529-532
,共4页
李瑞明%杨燕%刘莉%万松%贺昱霖%孟忠吉
李瑞明%楊燕%劉莉%萬鬆%賀昱霖%孟忠吉
리서명%양연%류리%만송%하욱림%맹충길
乙型肝炎病毒%临床分离株%重组体
乙型肝炎病毒%臨床分離株%重組體
을형간염병독%림상분리주%중조체
Hepatitis B virus%Clinical isolates%Recombinant
目的 克隆HBV临床分离株全长基因组,构建真核表达复制载体,为研究HBV的耐药机制提供基础.方法 从乙型肝炎患者血清中提取HBV DNA,PCR扩增HBV全长基因组,经SapI酶切后,克隆入pHY106载体,测序分析序列,然后用lipofectamine 2000将重组载体转染Huh7细胞,3d后收集培养上清液,ELISA检测HBsAg、HBeAg水平;Real-time PCR检测细胞培养上清液中HBV含量;Southern印迹检测细胞内HBV复制中间体.结果 获得5株HBV临床分离株均为野生型,其中基因B型3株,基因C型2株.成功构建5株HBV临床分离株的复制型质粒,在转染Huh7细胞的上清液中检测到HBsAg、HBeAg及HBV DNA,细胞内检测到HBV复制中间体.结论 成功克隆并构建了HBV 临床分离株复制型质粒,这种复制型质粒将在HBV临床分离株的耐药机制和药物敏感性等方面研究中发挥重要作用.
目的 剋隆HBV臨床分離株全長基因組,構建真覈錶達複製載體,為研究HBV的耐藥機製提供基礎.方法 從乙型肝炎患者血清中提取HBV DNA,PCR擴增HBV全長基因組,經SapI酶切後,剋隆入pHY106載體,測序分析序列,然後用lipofectamine 2000將重組載體轉染Huh7細胞,3d後收集培養上清液,ELISA檢測HBsAg、HBeAg水平;Real-time PCR檢測細胞培養上清液中HBV含量;Southern印跡檢測細胞內HBV複製中間體.結果 穫得5株HBV臨床分離株均為野生型,其中基因B型3株,基因C型2株.成功構建5株HBV臨床分離株的複製型質粒,在轉染Huh7細胞的上清液中檢測到HBsAg、HBeAg及HBV DNA,細胞內檢測到HBV複製中間體.結論 成功剋隆併構建瞭HBV 臨床分離株複製型質粒,這種複製型質粒將在HBV臨床分離株的耐藥機製和藥物敏感性等方麵研究中髮揮重要作用.
목적 극륭HBV림상분리주전장기인조,구건진핵표체복제재체,위연구HBV적내약궤제제공기출.방법 종을형간염환자혈청중제취HBV DNA,PCR확증HBV전장기인조,경SapI매절후,극륭입pHY106재체,측서분석서렬,연후용lipofectamine 2000장중조재체전염Huh7세포,3d후수집배양상청액,ELISA검측HBsAg、HBeAg수평;Real-time PCR검측세포배양상청액중HBV함량;Southern인적검측세포내HBV복제중간체.결과 획득5주HBV림상분리주균위야생형,기중기인B형3주,기인C형2주.성공구건5주HBV림상분리주적복제형질립,재전염Huh7세포적상청액중검측도HBsAg、HBeAg급HBV DNA,세포내검측도HBV복제중간체.결론 성공극륭병구건료HBV 림상분리주복제형질립,저충복제형질립장재HBV림상분리주적내약궤제화약물민감성등방면연구중발휘중요작용.
