CAJ | 학술논문

目的：研究促红细胞生成素（ EPO）对高糖诱导人肾小球系膜细胞（ MCs）增殖及其表达相关细胞因子和炎性因子的影响，探讨EPO对肾脏组织的生物学效应。方法2014年12月—2015年5月选取人MCs，采用随机数字表法分为：空白对照组、高糖诱导组、甘露醇对照组、 EPO对照组、5 U／ml EPO干预组、10 U／ml EPO干预组、20 U／ml EPO干预组、 Rho激酶抑制剂组。采用反转录聚合酶链式反应（ RT－PCR ）法检测RhoA、锌离子相关的RhoA蛋白1（ ROCK1） mRNA表达水平；酶联免疫吸附试验法（ ELISA）检测结缔组织生长因子（ CTGF）、Ⅳ型胶原蛋白、白介素6（IL－6）、肿瘤坏死因子α（TNF－α）表达水平； CCK－8法测定细胞增殖吸光度（OD值）。结果高糖诱导组较空白对照组RhoA、 ROCK1 mRNA表达水平升高（ P＜0.05）；5 U／ml EPO干预组、10 U／ml EPO干预组、20 U／ml EPO干预组较高糖诱导组RhoA、 ROCK1 mRNA表达水平降低（ P＜0.05）；5 U／ml EPO干预组、10 U／ml EPO干预组、20 U／ml EPO干预组RhoA、 ROCK1 mRNA表达水平组间两两比较，差异均有统计学意义（ P＜0.05）； Rho激酶抑制剂组较5 U／ml EPO干预组、10 U／ml EPO干预组、20 U／ml EPO干预组RhoA mRNA表达水平升高， ROCK1 mRNA表达水平降低（ P＜0.05）。高糖诱导组、5 U／ml EPO干预组、10 U／ml EPO干预组、20 U／ml EPO干预组RhoA mRNA表达水平与ROCK1 mRNA表达水平均呈正相关（r值分别为0.829、0.898、0.831、0.861， P＜0.05）。高糖诱导组较空白对照组培养24 h时CTGF及Ⅳ型胶原蛋白、培养24 h及48 h时IL－6及TNF－α表达水平升高（ P＜0.05）；5 U／ml EPO干预组、10 U／ml EPO干预组、20 U／ml EPO干预组、 Rho激酶抑制剂组培养24 h时CTGF及Ⅳ型胶原蛋白，培养24 h及48 h时IL－6及TNF－α表达水平较空白对照组升高，较高糖诱导组降低（ P＜0.05）；10 U／ml EPO干预组、20 U／ml EPO干预组、 Rho激酶抑制剂组较5 U／ml EPO干预组培养24 h时CTGF及Ⅳ型胶原蛋白、培养24 h及48 h时IL－6及TNF－α表达水平降低（P＜0.05）；20 U／ml EPO干预组、 Rho激酶抑制剂组较10 U／ml EPO干预组培养24 h时CTGF及Ⅳ型胶原蛋白、培养24 h及48 h时IL－6及TNF－α表达水平降低（ P＜0.05）。培养24、48、72 h时，高糖诱导组、 EPO对照组、5 U／ml EPO干预组、10 U／ml EPO干预组、20 U／ml EPO干预组较空白对照组MCs增殖OD值升高， Rho激酶抑制剂组较空白对照组MCs增殖OD值降低（ P＜0.05）；5 U／ml EPO干预组、10 U／ml EPO干预组、20 U／ml EPO干预组较高糖诱导组MCs增殖OD值升高， Rho激酶抑制剂组较高糖诱导组MCs增殖OD值降低（ P＜0.05）；5 U／ml EPO干预组、10 U／ml EPO干预组、20 U／ml EPO干预组MCs增殖OD值组间两两比较，差异均有统计学意义（ P＜0.05）；3组MCs增殖OD值培养24、48、72 h时两两比较，差异均有统计学意义（ P＜0.05）。结论高糖可抑制人MCs 增殖；高糖可促进人MCs 的CTGF、Ⅳ型胶原蛋白和IL －6、TNF －α的表达，而EPO 在一定浓度和时间范围内可抑制高糖诱导MCs 的CTGF、Ⅳ型胶原蛋白和IL －6、TNF －α的表达，促进增殖，保护肾脏，其机制可能与RhoA／ROCK 信号转导通路有关。目的：研究促紅細胞生成素（ EPO）對高糖誘導人腎小毬繫膜細胞（ MCs）增殖及其錶達相關細胞因子和炎性因子的影響，探討EPO對腎髒組織的生物學效應。方法2014年12月—2015年5月選取人MCs，採用隨機數字錶法分為：空白對照組、高糖誘導組、甘露醇對照組、 EPO對照組、5 U／ml EPO榦預組、10 U／ml EPO榦預組、20 U／ml EPO榦預組、 Rho激酶抑製劑組。採用反轉錄聚閤酶鏈式反應（ RT－PCR ）法檢測RhoA、鋅離子相關的RhoA蛋白1（ ROCK1） mRNA錶達水平；酶聯免疫吸附試驗法（ ELISA）檢測結締組織生長因子（ CTGF）、Ⅳ型膠原蛋白、白介素6（IL－6）、腫瘤壞死因子α（TNF－α）錶達水平； CCK－8法測定細胞增殖吸光度（OD值）。結果高糖誘導組較空白對照組RhoA、 ROCK1 mRNA錶達水平升高（ P＜0.05）；5 U／ml EPO榦預組、10 U／ml EPO榦預組、20 U／ml EPO榦預組較高糖誘導組RhoA、 ROCK1 mRNA錶達水平降低（ P＜0.05）；5 U／ml EPO榦預組、10 U／ml EPO榦預組、20 U／ml EPO榦預組RhoA、 ROCK1 mRNA錶達水平組間兩兩比較，差異均有統計學意義（ P＜0.05）； Rho激酶抑製劑組較5 U／ml EPO榦預組、10 U／ml EPO榦預組、20 U／ml EPO榦預組RhoA mRNA錶達水平升高， ROCK1 mRNA錶達水平降低（ P＜0.05）。高糖誘導組、5 U／ml EPO榦預組、10 U／ml EPO榦預組、20 U／ml EPO榦預組RhoA mRNA錶達水平與ROCK1 mRNA錶達水平均呈正相關（r值分彆為0.829、0.898、0.831、0.861， P＜0.05）。高糖誘導組較空白對照組培養24 h時CTGF及Ⅳ型膠原蛋白、培養24 h及48 h時IL－6及TNF－α錶達水平升高（ P＜0.05）；5 U／ml EPO榦預組、10 U／ml EPO榦預組、20 U／ml EPO榦預組、 Rho激酶抑製劑組培養24 h時CTGF及Ⅳ型膠原蛋白，培養24 h及48 h時IL－6及TNF－α錶達水平較空白對照組升高，較高糖誘導組降低（ P＜0.05）；10 U／ml EPO榦預組、20 U／ml EPO榦預組、 Rho激酶抑製劑組較5 U／ml EPO榦預組培養24 h時CTGF及Ⅳ型膠原蛋白、培養24 h及48 h時IL－6及TNF－α錶達水平降低（P＜0.05）；20 U／ml EPO榦預組、 Rho激酶抑製劑組較10 U／ml EPO榦預組培養24 h時CTGF及Ⅳ型膠原蛋白、培養24 h及48 h時IL－6及TNF－α錶達水平降低（ P＜0.05）。培養24、48、72 h時，高糖誘導組、 EPO對照組、5 U／ml EPO榦預組、10 U／ml EPO榦預組、20 U／ml EPO榦預組較空白對照組MCs增殖OD值升高， Rho激酶抑製劑組較空白對照組MCs增殖OD值降低（ P＜0.05）；5 U／ml EPO榦預組、10 U／ml EPO榦預組、20 U／ml EPO榦預組較高糖誘導組MCs增殖OD值升高， Rho激酶抑製劑組較高糖誘導組MCs增殖OD值降低（ P＜0.05）；5 U／ml EPO榦預組、10 U／ml EPO榦預組、20 U／ml EPO榦預組MCs增殖OD值組間兩兩比較，差異均有統計學意義（ P＜0.05）；3組MCs增殖OD值培養24、48、72 h時兩兩比較，差異均有統計學意義（ P＜0.05）。結論高糖可抑製人MCs 增殖；高糖可促進人MCs 的CTGF、Ⅳ型膠原蛋白和IL －6、TNF －α的錶達，而EPO 在一定濃度和時間範圍內可抑製高糖誘導MCs 的CTGF、Ⅳ型膠原蛋白和IL －6、TNF －α的錶達，促進增殖，保護腎髒，其機製可能與RhoA／ROCK 信號轉導通路有關。
목적：연구촉홍세포생성소（ EPO）대고당유도인신소구계막세포（ MCs）증식급기표체상관세포인자화염성인자적영향，탐토EPO대신장조직적생물학효응。방법2014년12월—2015년5월선취인MCs，채용수궤수자표법분위：공백대조조、고당유도조、감로순대조조、 EPO대조조、5 U／ml EPO간예조、10 U／ml EPO간예조、20 U／ml EPO간예조、 Rho격매억제제조。채용반전록취합매련식반응（ RT－PCR ）법검측RhoA、자리자상관적RhoA단백1（ ROCK1） mRNA표체수평；매련면역흡부시험법（ ELISA）검측결체조직생장인자（ CTGF）、Ⅳ형효원단백、백개소6（IL－6）、종류배사인자α（TNF－α）표체수평； CCK－8법측정세포증식흡광도（OD치）。결과고당유도조교공백대조조RhoA、 ROCK1 mRNA표체수평승고（ P＜0.05）；5 U／ml EPO간예조、10 U／ml EPO간예조、20 U／ml EPO간예조교고당유도조RhoA、 ROCK1 mRNA표체수평강저（ P＜0.05）；5 U／ml EPO간예조、10 U／ml EPO간예조、20 U／ml EPO간예조RhoA、 ROCK1 mRNA표체수평조간량량비교，차이균유통계학의의（ P＜0.05）； Rho격매억제제조교5 U／ml EPO간예조、10 U／ml EPO간예조、20 U／ml EPO간예조RhoA mRNA표체수평승고， ROCK1 mRNA표체수평강저（ P＜0.05）。고당유도조、5 U／ml EPO간예조、10 U／ml EPO간예조、20 U／ml EPO간예조RhoA mRNA표체수평여ROCK1 mRNA표체수평균정정상관（r치분별위0.829、0.898、0.831、0.861， P＜0.05）。고당유도조교공백대조조배양24 h시CTGF급Ⅳ형효원단백、배양24 h급48 h시IL－6급TNF－α표체수평승고（ P＜0.05）；5 U／ml EPO간예조、10 U／ml EPO간예조、20 U／ml EPO간예조、 Rho격매억제제조배양24 h시CTGF급Ⅳ형효원단백，배양24 h급48 h시IL－6급TNF－α표체수평교공백대조조승고，교고당유도조강저（ P＜0.05）；10 U／ml EPO간예조、20 U／ml EPO간예조、 Rho격매억제제조교5 U／ml EPO간예조배양24 h시CTGF급Ⅳ형효원단백、배양24 h급48 h시IL－6급TNF－α표체수평강저（P＜0.05）；20 U／ml EPO간예조、 Rho격매억제제조교10 U／ml EPO간예조배양24 h시CTGF급Ⅳ형효원단백、배양24 h급48 h시IL－6급TNF－α표체수평강저（ P＜0.05）。배양24、48、72 h시，고당유도조、 EPO대조조、5 U／ml EPO간예조、10 U／ml EPO간예조、20 U／ml EPO간예조교공백대조조MCs증식OD치승고， Rho격매억제제조교공백대조조MCs증식OD치강저（ P＜0.05）；5 U／ml EPO간예조、10 U／ml EPO간예조、20 U／ml EPO간예조교고당유도조MCs증식OD치승고， Rho격매억제제조교고당유도조MCs증식OD치강저（ P＜0.05）；5 U／ml EPO간예조、10 U／ml EPO간예조、20 U／ml EPO간예조MCs증식OD치조간량량비교，차이균유통계학의의（ P＜0.05）；3조MCs증식OD치배양24、48、72 h시량량비교，차이균유통계학의의（ P＜0.05）。결론고당가억제인MCs 증식；고당가촉진인MCs 적CTGF、Ⅳ형효원단백화IL －6、TNF －α적표체，이EPO 재일정농도화시간범위내가억제고당유도MCs 적CTGF、Ⅳ형효원단백화IL －6、TNF －α적표체，촉진증식，보호신장，기궤제가능여RhoA／ROCK 신호전도통로유관。
Objective To explore the effect of rythropoietin ( EPO) on the proliferation of high glucose -cultured human kidney mesangial cells ( MCs) and its expression levels of cytokines and inflammatory factors and investigate the biological effects of EPO on renal tissue.Methods From December 2014 to May 2015, obtained MCs and employed random number table method to divide them into eight groups: blank control group , high glucose induction group , mannitol control group , EPO control group , 5 U/ml EPO intervention group , 10 U/ml EPO intervention group , 20 U/ml EPO intervention group and Rho kinase inhibitor group.The mRNA levels of RhoA and ROCK 1 were determined by RT-PCR; connective tissue growth factor ( CTGF) , Collagen Ⅳ、 Interleukin -6 ( IL-6 ) and tumor necrosis factor -α( TNF -α) were detected by ELISA;absorbance value (OD value) of cell proliferation was measured by CCK -8.Results High glucose induction group was higher ( P<0.05 ) than blank control group in the mRNA expression levels of RhoA and ROCK 1;5 U/ml EPO intervention group , 10 U/ml EPO intervention group and 20 U/ml EPO intervention group were lower (P<0.05) than glucose induction group in the mRNA expression levels of RhoA and ROCK 1; the pairwise comparison among 5 U/ml EPO intervention group , 10 U/ml EPO intervention group and 20 U/ml EPO intervention group showed significant differences ( P<0.05) in the mRNA expression levels of RhoA and ROCK1;Rho kinase inhibitor group was higher (P<0.05) than 5 U/ml EPO intervention group, 10 U/ml EPO intervention group and 20 U/ml EPO intervention group in the mRNA expression levels of RhoA and lower in the mRNA expression levels of ROCK 1.The mRNA expression level of RhoA was positively correlated with that of ROCK 1 in high glucose induction group , 5 U/ml EPO intervention group , 10 U/ml EPO intervention group and 20 U/ml EPO intervention group ( r=0.829, 0.898, 0.831, 0.861;P<0.05) .High glucose group was higher (P <0.05) than blank control group in the levels of CTGF and Collagen Ⅳat 24 h and the levels of IL-6 and TNF-αat 24 h and 48 h;5 U/ml EPO intervention group , 10 U/ml EPO intervention group , 20 U/ml EPO intervention group and Rho kinase inhibitor group were higher ( P<0.05) than blank control group and were lower than high glucose induction group in the levels of CTGF and Collagen Ⅳat 24 h and the levels of IL-6 and TNF-αat 24 h and 48 h;10 U/ml EPO intervention group , 20 U/ml EPO intervention group and Rho kinase inhibitor group were lower (P<0.05) than 5 U/ml EPO intervention group in the levels of CTGF and Collagen Ⅳat 24 h and the levels of IL-6 and TNF-αat 24 h and 48 h;20 U/ml EPO intervention group and Rho kinase inhibitor group were lower ( P<0.05) than 10 U/ml EPO intervention group in the levels of CTGF and Collagen Ⅳat 24 h and the levels of IL-6 and TNF-αat 24 h and 48 h.At 24 h, 48 h and 72 h, high glucose induction group , EPO control group , 5 U/ml EPO intervention group , 10 U/ml EPO intervention group and 20 U/ml EPO intervention group were higher (P<0.05) than blank control group in the OD value of MCs proliferation , and Rho kinase inhibitor group was lower ( P<0.05 ) than high glucose induction group in the OD value of MCs proliferation;the pairwise comparison among 5 U/ml EPO intervention group , 10 U/ml EPO intervention group and 20 U/ml EPO intervention group showed significant differences in the OD value of MCs proliferation ( P<0.05);in each of the three groups, the pairwise comparison of OD value of MCs proliferation among 24 h, 48 h and 72 h showed significant differences ( P<0.05) .Conclusion High glucose can inhibit the proliferation of MCs;high glucose can increase the expression of CTGF , Collagen Ⅳ, IL-6 and TNF-α, and EPO can inhibit the expression of CTGF , Collagen Ⅳ, IL-6 and TNF-αin MCs cultured by high glucose in certain concentration range and time range , facilitate proliferation and protect kidney.The mechanism may be related with the signal transduction pathway of RhoA /ROCK.