牙体牙髓牙周病学杂志
牙體牙髓牙週病學雜誌
아체아수아주병학잡지
Chinese Journal of Conservative Dentistry
2015年
9期
519-523
,共5页
宫春梅%张娟娟%夏天永%孙岩
宮春梅%張娟娟%夏天永%孫巖
궁춘매%장연연%하천영%손암
细胞外基质磷酸化糖蛋白%基因克隆%骨形成发生蛋白2%双荧光素酶基因检测
細胞外基質燐痠化糖蛋白%基因剋隆%骨形成髮生蛋白2%雙熒光素酶基因檢測
세포외기질린산화당단백%기인극륭%골형성발생단백2%쌍형광소매기인검측
MEPE%gene clone%BMP2%dual luciferase reporter assay
目的:研究细胞外基质磷酸化糖蛋白( MEPE)基因启动子在小鼠前成骨细胞中表达的调控机制. 方法:利用软件分析小鼠的MEPE基因启动子,得到5 条启动子候选序列后,设计引物进行不同长度MEPE基因启动子的构建,并分别将其转染小鼠前成骨细胞;然后利用双荧光素酶基因检测报告系统分析不同长度MEPE基因启动子在前成骨细胞中的转录活性,并同时观察BPM2对小鼠前骨细胞中不同长度MEPE基因启动子转录活性的影响及其时间效应. 结果:成功构建了P-78 ~ +66、P-140 ~ +66、P-300 ~ +66、P-500~ +66、P-1 081~ +66的MEPE基因启动子;分别转染小鼠前成骨细胞后,不同长度MEPE基因启动子的活性两两相比均有显著性差异(P<0. 05),其中以P-500~ +66的活性最强,推测-140~ -500区域可能为MEPE转录表达的调控元件主要结合部位; BMP2作用于不同长度MEPE基因启动子后检测发现,BMP2在启动子-140~ -500区域内可明显上调MEPE基因的转录活性(P<0. 05). 结论:成功构建了MEPE基因启动子,并发现BMP2调控MEPE基因启动子的主要区域在-140~ -500区域 .
目的:研究細胞外基質燐痠化糖蛋白( MEPE)基因啟動子在小鼠前成骨細胞中錶達的調控機製. 方法:利用軟件分析小鼠的MEPE基因啟動子,得到5 條啟動子候選序列後,設計引物進行不同長度MEPE基因啟動子的構建,併分彆將其轉染小鼠前成骨細胞;然後利用雙熒光素酶基因檢測報告繫統分析不同長度MEPE基因啟動子在前成骨細胞中的轉錄活性,併同時觀察BPM2對小鼠前骨細胞中不同長度MEPE基因啟動子轉錄活性的影響及其時間效應. 結果:成功構建瞭P-78 ~ +66、P-140 ~ +66、P-300 ~ +66、P-500~ +66、P-1 081~ +66的MEPE基因啟動子;分彆轉染小鼠前成骨細胞後,不同長度MEPE基因啟動子的活性兩兩相比均有顯著性差異(P<0. 05),其中以P-500~ +66的活性最彊,推測-140~ -500區域可能為MEPE轉錄錶達的調控元件主要結閤部位; BMP2作用于不同長度MEPE基因啟動子後檢測髮現,BMP2在啟動子-140~ -500區域內可明顯上調MEPE基因的轉錄活性(P<0. 05). 結論:成功構建瞭MEPE基因啟動子,併髮現BMP2調控MEPE基因啟動子的主要區域在-140~ -500區域 .
목적:연구세포외기질린산화당단백( MEPE)기인계동자재소서전성골세포중표체적조공궤제. 방법:이용연건분석소서적MEPE기인계동자,득도5 조계동자후선서렬후,설계인물진행불동장도MEPE기인계동자적구건,병분별장기전염소서전성골세포;연후이용쌍형광소매기인검측보고계통분석불동장도MEPE기인계동자재전성골세포중적전록활성,병동시관찰BPM2대소서전골세포중불동장도MEPE기인계동자전록활성적영향급기시간효응. 결과:성공구건료P-78 ~ +66、P-140 ~ +66、P-300 ~ +66、P-500~ +66、P-1 081~ +66적MEPE기인계동자;분별전염소서전성골세포후,불동장도MEPE기인계동자적활성량량상비균유현저성차이(P<0. 05),기중이P-500~ +66적활성최강,추측-140~ -500구역가능위MEPE전록표체적조공원건주요결합부위; BMP2작용우불동장도MEPE기인계동자후검측발현,BMP2재계동자-140~ -500구역내가명현상조MEPE기인적전록활성(P<0. 05). 결론:성공구건료MEPE기인계동자,병발현BMP2조공MEPE기인계동자적주요구역재-140~ -500구역 .
AIM: To study the molecular mechanisms of MEPE gene promoter expression in preosteoblasts in mouse. METHODS:MEPE gene promoter of mouse preosteoblasts was analysed by software( http://www. fruitfly. org/ seq_tools/promoter. html) , five candidate sequences were obtained. the primers for the construction of different lengths of MEPE gene promoters were designed; dual luciferase reporter assay was applied to analysis the effects for transcription activity of MEPE gene promoters with different lengths. The effects of BMP2 on the transcription activity of MEPE gene promoters in preosteoblasts were observed. RESULTS:MEPE gene promoters with the lengths of P-78~+66, P-140~ +66, P-300~ +66, P-500~ +66 and P-1081~ +66 were obtained. Double luciferase genetic testing report system analysis showed that the transcription activity of different lengths MEPE gene promoters was differ-ent(P<0. 05) . The transcription activity of MEPE gene promoter was significantly upregulated in the area of -140~-500 after BMP2 treatment. CONCLUSION:The location of MEPE gene promoter in mouse preosteoblasts was re-constructed. BMP2 may regulate the MEPE gene promoter at -140~ -500 area.
