中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
Chinese Journal of Zoonoses
2015年
8期
717-723
,共7页
王沂%余源%田喜凤%李冀%楮晗%王洋
王沂%餘源%田喜鳳%李冀%楮晗%王洋
왕기%여원%전희봉%리기%저함%왕양
蓝氏贾第鞭毛虫%翻译调控肿瘤蛋白%原核表达%序列分析
藍氏賈第鞭毛蟲%翻譯調控腫瘤蛋白%原覈錶達%序列分析
람씨가제편모충%번역조공종류단백%원핵표체%서렬분석
Giardia lamblia%translationally controlled tumour protein%prokaryotic expression%sequence analysis
目的 克隆C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)的翻译调控肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP)编码区,对其进行生物信息学分析和原核表达.方法 根据WB株贾第虫TCTP编码区序列设计引物,以C2株贾第虫基因组DNA为模板扩增获得TCTP编码区片段,双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),将酶切和测序验证正确的重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE及Western blot鉴定蛋白产物,采用Ni-NTA经亲和层析纯化重组蛋白.同时根据测序结果分析C2株贾第虫TCTP蛋白结构特征和进化关系.结果 克隆了包含酶切位点全长470 bp的C2株贾第虫TCTP编码区,构建了原核表达载体pET-28a(+)-TCTP,在Rosetta(DE3)中表达、纯化得到了相对分子量约18.5 kDa的融合蛋白,与预期相符;测序结果显示C2株贾第虫TCTP序列与WB株相同,生物信息学分析显示贾第虫TCTP蛋白虽然序列长度较其它物种更短但与裂殖酵母TCTP空间结构相似,均由4个β折叠和3个主要的α螺旋组成,位于序列中部的不规则环状结构更小,仅9个氨基酸残基组成,在进化上与其它真核生物亲缘关系较远.结论 成功克隆表达了贾第虫TCTP,为TCTP功能及贾第虫致病机制的研究提供了实验依据.
目的 剋隆C2株藍氏賈第鞭毛蟲(Giardia lamblia,簡稱賈第蟲)的翻譯調控腫瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP)編碼區,對其進行生物信息學分析和原覈錶達.方法 根據WB株賈第蟲TCTP編碼區序列設計引物,以C2株賈第蟲基因組DNA為模闆擴增穫得TCTP編碼區片段,雙酶切連入原覈錶達載體pET-28a(+),將酶切和測序驗證正確的重組質粒轉化E.coli Rosetta(DE3),經IPTG誘導錶達融閤蛋白,SDS-PAGE及Western blot鑒定蛋白產物,採用Ni-NTA經親和層析純化重組蛋白.同時根據測序結果分析C2株賈第蟲TCTP蛋白結構特徵和進化關繫.結果 剋隆瞭包含酶切位點全長470 bp的C2株賈第蟲TCTP編碼區,構建瞭原覈錶達載體pET-28a(+)-TCTP,在Rosetta(DE3)中錶達、純化得到瞭相對分子量約18.5 kDa的融閤蛋白,與預期相符;測序結果顯示C2株賈第蟲TCTP序列與WB株相同,生物信息學分析顯示賈第蟲TCTP蛋白雖然序列長度較其它物種更短但與裂殖酵母TCTP空間結構相似,均由4箇β摺疊和3箇主要的α螺鏇組成,位于序列中部的不規則環狀結構更小,僅9箇氨基痠殘基組成,在進化上與其它真覈生物親緣關繫較遠.結論 成功剋隆錶達瞭賈第蟲TCTP,為TCTP功能及賈第蟲緻病機製的研究提供瞭實驗依據.
목적 극륭C2주람씨가제편모충(Giardia lamblia,간칭가제충)적번역조공종류단백(Translationally controlled tumor protein,TCTP)편마구,대기진행생물신식학분석화원핵표체.방법 근거WB주가제충TCTP편마구서렬설계인물,이C2주가제충기인조DNA위모판확증획득TCTP편마구편단,쌍매절련입원핵표체재체pET-28a(+),장매절화측서험증정학적중조질립전화E.coli Rosetta(DE3),경IPTG유도표체융합단백,SDS-PAGE급Western blot감정단백산물,채용Ni-NTA경친화층석순화중조단백.동시근거측서결과분석C2주가제충TCTP단백결구특정화진화관계.결과 극륭료포함매절위점전장470 bp적C2주가제충TCTP편마구,구건료원핵표체재체pET-28a(+)-TCTP,재Rosetta(DE3)중표체、순화득도료상대분자량약18.5 kDa적융합단백,여예기상부;측서결과현시C2주가제충TCTP서렬여WB주상동,생물신식학분석현시가제충TCTP단백수연서렬장도교기타물충경단단여렬식효모TCTP공간결구상사,균유4개β절첩화3개주요적α라선조성,위우서렬중부적불규칙배상결구경소,부9개안기산잔기조성,재진화상여기타진핵생물친연관계교원.결론 성공극륭표체료가제충TCTP,위TCTP공능급가제충치병궤제적연구제공료실험의거.
