中国循证儿科杂志
中國循證兒科雜誌
중국순증인과잡지
Chinese Journal of Evidence Based Pediatrics
2015年
4期
297-301
,共5页
骆伟丽%茅幸%孙建勇%赵仲华%张志刚%吴慧娟
駱偉麗%茅倖%孫建勇%趙仲華%張誌剛%吳慧娟
락위려%모행%손건용%조중화%장지강%오혜연
饰胶蛋白聚糖%泛素特异性修饰酶2-69%系膜细胞
飾膠蛋白聚糖%汎素特異性脩飾酶2-69%繫膜細胞
식효단백취당%범소특이성수식매2-69%계막세포
Decorin%Ubiquitin-specific processing protease 2-69%Mesangial cells
目的 研究泛素特异性修饰酶2-69(USP2-69)对系膜细胞(MC)内饰胶蛋白聚糖(DCN)表达和泛素化的调节作用.方法 ①培养MC细胞,采用Western blot法检测大鼠肾MC内USP2-69的表达;②采用免疫共沉淀、激光共聚焦和免疫荧光法,检测MC内USP2-69是否与DCN结合,并观察两者在MC内的定位;③将pRK5-USP2-69-HA质粒瞬时转染MC后,用Western blot法检测HA、USP2-69和DCN的蛋白表达,用免疫共沉淀法检测DCN的泛素化水平;④采用USP2-69siRNA处理MC,用PCR检测USP2-69和DCN的mRNA表达,用time-course Western blot法检测DCN的半衰期,Westernblot法检测DCN的下游效应分子(TGF-β1和ColⅣ)的蛋白表达.结果 ①USP2-69在MC、肝细胞(BRL-3A)和足细胞(GEC)内均有表达,其在MC内的基础蛋白表达水平显著高于BRL-3A和GEC[MCs:(0.27±0.05),BRL-3A:(0.035±0.009),GEC:(0.012 ±0.004),P＜0.01].②MC总蛋白经DCN抗体免疫沉淀后,可检测到USP2-69的表达;经USP2-69抗体免疫沉淀后,可检测到DCN表达;且在MC胞质内,代表USP2-69蛋白的荧光与代表DCN蛋白的荧光存在共定位.③转染pRK5-USP2-69-HA质粒的MC内可检测到代表外源性USP2-69表达的HA蛋白,USP2-69和DCN蛋白表达的升高,同时DCN的泛素化水平明显降低.④经USP2-69 RNA干扰的MC内DCN的mRNA水平没有明显改变,但其半衰期明显缩短(3 h),且TGF-β1和ColⅣ的蛋白表达均明显升高.结论 大鼠肾MC内USP2-69可与DCN相结合,及两者在胞质内共定位,USP2-69能够降低MC内DCN的泛素化水平及提高DCN蛋白总量并促进其功能.
目的 研究汎素特異性脩飾酶2-69(USP2-69)對繫膜細胞(MC)內飾膠蛋白聚糖(DCN)錶達和汎素化的調節作用.方法 ①培養MC細胞,採用Western blot法檢測大鼠腎MC內USP2-69的錶達;②採用免疫共沉澱、激光共聚焦和免疫熒光法,檢測MC內USP2-69是否與DCN結閤,併觀察兩者在MC內的定位;③將pRK5-USP2-69-HA質粒瞬時轉染MC後,用Western blot法檢測HA、USP2-69和DCN的蛋白錶達,用免疫共沉澱法檢測DCN的汎素化水平;④採用USP2-69siRNA處理MC,用PCR檢測USP2-69和DCN的mRNA錶達,用time-course Western blot法檢測DCN的半衰期,Westernblot法檢測DCN的下遊效應分子(TGF-β1和ColⅣ)的蛋白錶達.結果 ①USP2-69在MC、肝細胞(BRL-3A)和足細胞(GEC)內均有錶達,其在MC內的基礎蛋白錶達水平顯著高于BRL-3A和GEC[MCs:(0.27±0.05),BRL-3A:(0.035±0.009),GEC:(0.012 ±0.004),P＜0.01].②MC總蛋白經DCN抗體免疫沉澱後,可檢測到USP2-69的錶達;經USP2-69抗體免疫沉澱後,可檢測到DCN錶達;且在MC胞質內,代錶USP2-69蛋白的熒光與代錶DCN蛋白的熒光存在共定位.③轉染pRK5-USP2-69-HA質粒的MC內可檢測到代錶外源性USP2-69錶達的HA蛋白,USP2-69和DCN蛋白錶達的升高,同時DCN的汎素化水平明顯降低.④經USP2-69 RNA榦擾的MC內DCN的mRNA水平沒有明顯改變,但其半衰期明顯縮短(3 h),且TGF-β1和ColⅣ的蛋白錶達均明顯升高.結論 大鼠腎MC內USP2-69可與DCN相結閤,及兩者在胞質內共定位,USP2-69能夠降低MC內DCN的汎素化水平及提高DCN蛋白總量併促進其功能.
목적 연구범소특이성수식매2-69(USP2-69)대계막세포(MC)내식효단백취당(DCN)표체화범소화적조절작용.방법 ①배양MC세포,채용Western blot법검측대서신MC내USP2-69적표체;②채용면역공침정、격광공취초화면역형광법,검측MC내USP2-69시부여DCN결합,병관찰량자재MC내적정위;③장pRK5-USP2-69-HA질립순시전염MC후,용Western blot법검측HA、USP2-69화DCN적단백표체,용면역공침정법검측DCN적범소화수평;④채용USP2-69siRNA처리MC,용PCR검측USP2-69화DCN적mRNA표체,용time-course Western blot법검측DCN적반쇠기,Westernblot법검측DCN적하유효응분자(TGF-β1화ColⅣ)적단백표체.결과 ①USP2-69재MC、간세포(BRL-3A)화족세포(GEC)내균유표체,기재MC내적기출단백표체수평현저고우BRL-3A화GEC[MCs:(0.27±0.05),BRL-3A:(0.035±0.009),GEC:(0.012 ±0.004),P＜0.01].②MC총단백경DCN항체면역침정후,가검측도USP2-69적표체;경USP2-69항체면역침정후,가검측도DCN표체;차재MC포질내,대표USP2-69단백적형광여대표DCN단백적형광존재공정위.③전염pRK5-USP2-69-HA질립적MC내가검측도대표외원성USP2-69표체적HA단백,USP2-69화DCN단백표체적승고,동시DCN적범소화수평명현강저.④경USP2-69 RNA간우적MC내DCN적mRNA수평몰유명현개변,단기반쇠기명현축단(3 h),차TGF-β1화ColⅣ적단백표체균명현승고.결론 대서신MC내USP2-69가여DCN상결합,급량자재포질내공정위,USP2-69능구강저MC내DCN적범소화수평급제고DCN단백총량병촉진기공능.
