西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
Journal of Xi'an Jiaotong University(Medical Sciences)
2015年
5期
580-586
,共7页
冯燕%张波%王少兰%王宝英%李红波%杜芳英%俞小瑞
馮燕%張波%王少蘭%王寶英%李紅波%杜芳英%俞小瑞
풍연%장파%왕소란%왕보영%리홍파%두방영%유소서
[Ca2+]i%H2O2%SD大鼠%视网膜细胞%凋亡
[Ca2+]i%H2O2%SD大鼠%視網膜細胞%凋亡
[Ca2+]i%H2O2%SD대서%시망막세포%조망
[Ca2+]i%H2O2%SD rat%retinal cell%apoptosis
目的 观察H2O2诱导原代培养SD大鼠视网膜细胞凋亡过程中细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化及其来源.方法 取1～3 d内新生SD大鼠视网膜进行原代细胞培养,以100 μmol/L H2O2作用0、2、4、8、12、24h,采用MTT法进行细胞活力检测,应用Hoechst 33342染色法进行细胞凋亡检测,以Fluo-3 AM为细胞内Ca2+探针并利用荧光激活细胞分类技术(FACS)进行[Ca2+]i检测,确定H2 O2诱导细胞损伤及凋亡过程中[Ca2+]i的变化;应用细胞外Ca2+螯合剂EGTA初步检测H2 O2诱导的[Ca2+]i变化是否源于细胞外Ca2+内流.结果 100 μmol/L H2O2可诱导原代培养的SD大鼠视网膜细胞发生凋亡,且凋亡数目呈时间依赖性递增;100 μmol/L H2O2作用2～24 h均可显著降低细胞活力,而[Ca2+]i的升高出现在H2 O2作用2h且维持至12h,然后逐渐下降,至24 h恢复至正常水平;0.5～5mmol/L EGTA可显著削弱由100 μmol/L H2O2作用2h导致的[Ca2+]i增加.结论 在H2O2诱导原代培养的SD大鼠视网膜细胞发生凋亡过程中,[Ca2+]i的升高发生在凋亡的早期阶段,而非细胞凋亡全过程中;H2O2的损伤作用所导致的[Ca2+]i升高部分来源于细胞外Ca2+的内流.
目的 觀察H2O2誘導原代培養SD大鼠視網膜細胞凋亡過程中細胞內Ca2+濃度([Ca2+]i)的變化及其來源.方法 取1～3 d內新生SD大鼠視網膜進行原代細胞培養,以100 μmol/L H2O2作用0、2、4、8、12、24h,採用MTT法進行細胞活力檢測,應用Hoechst 33342染色法進行細胞凋亡檢測,以Fluo-3 AM為細胞內Ca2+探針併利用熒光激活細胞分類技術(FACS)進行[Ca2+]i檢測,確定H2 O2誘導細胞損傷及凋亡過程中[Ca2+]i的變化;應用細胞外Ca2+螯閤劑EGTA初步檢測H2 O2誘導的[Ca2+]i變化是否源于細胞外Ca2+內流.結果 100 μmol/L H2O2可誘導原代培養的SD大鼠視網膜細胞髮生凋亡,且凋亡數目呈時間依賴性遞增;100 μmol/L H2O2作用2～24 h均可顯著降低細胞活力,而[Ca2+]i的升高齣現在H2 O2作用2h且維持至12h,然後逐漸下降,至24 h恢複至正常水平;0.5～5mmol/L EGTA可顯著削弱由100 μmol/L H2O2作用2h導緻的[Ca2+]i增加.結論 在H2O2誘導原代培養的SD大鼠視網膜細胞髮生凋亡過程中,[Ca2+]i的升高髮生在凋亡的早期階段,而非細胞凋亡全過程中;H2O2的損傷作用所導緻的[Ca2+]i升高部分來源于細胞外Ca2+的內流.
목적 관찰H2O2유도원대배양SD대서시망막세포조망과정중세포내Ca2+농도([Ca2+]i)적변화급기래원.방법 취1～3 d내신생SD대서시망막진행원대세포배양,이100 μmol/L H2O2작용0、2、4、8、12、24h,채용MTT법진행세포활력검측,응용Hoechst 33342염색법진행세포조망검측,이Fluo-3 AM위세포내Ca2+탐침병이용형광격활세포분류기술(FACS)진행[Ca2+]i검측,학정H2 O2유도세포손상급조망과정중[Ca2+]i적변화;응용세포외Ca2+오합제EGTA초보검측H2 O2유도적[Ca2+]i변화시부원우세포외Ca2+내류.결과 100 μmol/L H2O2가유도원대배양적SD대서시망막세포발생조망,차조망수목정시간의뢰성체증;100 μmol/L H2O2작용2～24 h균가현저강저세포활력,이[Ca2+]i적승고출현재H2 O2작용2h차유지지12h,연후축점하강,지24 h회복지정상수평;0.5～5mmol/L EGTA가현저삭약유100 μmol/L H2O2작용2h도치적[Ca2+]i증가.결론 재H2O2유도원대배양적SD대서시망막세포발생조망과정중,[Ca2+]i적승고발생재조망적조기계단,이비세포조망전과정중;H2O2적손상작용소도치적[Ca2+]i승고부분래원우세포외Ca2+적내류.
