肾脏病与透析肾移植杂志
腎髒病與透析腎移植雜誌
신장병여투석신이식잡지
Chinese Journal of Nephrology, Dialysis & Transplantation
2015年
5期
447-452
,共6页
沈云琳%钮小玲%刘华杰%孙蕾%匡新宇%黄文彦
瀋雲琳%鈕小玲%劉華傑%孫蕾%劻新宇%黃文彥
침운림%뉴소령%류화걸%손뢰%광신우%황문언
补体应答基因32%上皮-间充质转化%转化生长因子β%转录调控
補體應答基因32%上皮-間充質轉化%轉化生長因子β%轉錄調控
보체응답기인32%상피-간충질전화%전화생장인자β%전록조공
response gene to complement 32%epithelial-mesenchymal transition%transforming growth factor-β%transcriptional regulation
目的:前期工作发现补体应答基因32(RGC-32)是转化生长因子β(TGF-β)诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中Smad信号下游的关键调控分子.本研究拟进一步明确TGF-β诱导肾小管EMT过程中RGC-32的转录调控机制. 方法:体外培养NRK-52E细胞,利用荧光素酶报告基因实验检测RGC-32启动子活性以确定Smad结合元件(SBE)是否为TGF-β诱导的RGC-32转录调控位点;通过凝胶迁移率实验(EMSA)明确与之结合的转录调控分子. 结果:(1)转染野生型SBE片段的NRK-52E细胞荧光素酶活性明显增高,而转染突变的SBE片段的细胞无此表现,表明SBE是调控TGF-β诱导的RGC-32转录启动的关键位点.(2)合成32P标记的包含SBE的寡核苷酸探针行EMSA可见TGF-β诱导的核蛋白与探针复合物生成,且加入包含SBE序列的竞争片段可以抑制此核蛋白-探针复合物的形成,表明有蛋白与SBE结合并调控RGC-32的转录.(3)当加入不同的Smad抗体行超迁移实验发现Smad2和Smad3抗体可以和复合物相互作用,表明Smad2和Smad3可能是TGF-β诱导的转录复合物的组成部分.(4)将Smad2和Smad3分别与p-1500RGCluc共同转染NRK-52E细胞,Smad3可以显著增加RGC-32启动子活性,表明Smad3是TGF-β诱导的转录复合物的组成部分,而不是Smad2. 结论:在TGF-β诱导肾小管EMT过程中,Smad3通过与RGC-32启动子区SBE结合,从而调控肾小管EMT过程.
目的:前期工作髮現補體應答基因32(RGC-32)是轉化生長因子β(TGF-β)誘導的腎小管上皮細胞-間充質轉化(EMT)過程中Smad信號下遊的關鍵調控分子.本研究擬進一步明確TGF-β誘導腎小管EMT過程中RGC-32的轉錄調控機製. 方法:體外培養NRK-52E細胞,利用熒光素酶報告基因實驗檢測RGC-32啟動子活性以確定Smad結閤元件(SBE)是否為TGF-β誘導的RGC-32轉錄調控位點;通過凝膠遷移率實驗(EMSA)明確與之結閤的轉錄調控分子. 結果:(1)轉染野生型SBE片段的NRK-52E細胞熒光素酶活性明顯增高,而轉染突變的SBE片段的細胞無此錶現,錶明SBE是調控TGF-β誘導的RGC-32轉錄啟動的關鍵位點.(2)閤成32P標記的包含SBE的寡覈苷痠探針行EMSA可見TGF-β誘導的覈蛋白與探針複閤物生成,且加入包含SBE序列的競爭片段可以抑製此覈蛋白-探針複閤物的形成,錶明有蛋白與SBE結閤併調控RGC-32的轉錄.(3)噹加入不同的Smad抗體行超遷移實驗髮現Smad2和Smad3抗體可以和複閤物相互作用,錶明Smad2和Smad3可能是TGF-β誘導的轉錄複閤物的組成部分.(4)將Smad2和Smad3分彆與p-1500RGCluc共同轉染NRK-52E細胞,Smad3可以顯著增加RGC-32啟動子活性,錶明Smad3是TGF-β誘導的轉錄複閤物的組成部分,而不是Smad2. 結論:在TGF-β誘導腎小管EMT過程中,Smad3通過與RGC-32啟動子區SBE結閤,從而調控腎小管EMT過程.
목적:전기공작발현보체응답기인32(RGC-32)시전화생장인자β(TGF-β)유도적신소관상피세포-간충질전화(EMT)과정중Smad신호하유적관건조공분자.본연구의진일보명학TGF-β유도신소관EMT과정중RGC-32적전록조공궤제. 방법:체외배양NRK-52E세포,이용형광소매보고기인실험검측RGC-32계동자활성이학정Smad결합원건(SBE)시부위TGF-β유도적RGC-32전록조공위점;통과응효천이솔실험(EMSA)명학여지결합적전록조공분자. 결과:(1)전염야생형SBE편단적NRK-52E세포형광소매활성명현증고,이전염돌변적SBE편단적세포무차표현,표명SBE시조공TGF-β유도적RGC-32전록계동적관건위점.(2)합성32P표기적포함SBE적과핵감산탐침행EMSA가견TGF-β유도적핵단백여탐침복합물생성,차가입포함SBE서렬적경쟁편단가이억제차핵단백-탐침복합물적형성,표명유단백여SBE결합병조공RGC-32적전록.(3)당가입불동적Smad항체행초천이실험발현Smad2화Smad3항체가이화복합물상호작용,표명Smad2화Smad3가능시TGF-β유도적전록복합물적조성부분.(4)장Smad2화Smad3분별여p-1500RGCluc공동전염NRK-52E세포,Smad3가이현저증가RGC-32계동자활성,표명Smad3시TGF-β유도적전록복합물적조성부분,이불시Smad2. 결론:재TGF-β유도신소관EMT과정중,Smad3통과여RGC-32계동자구SBE결합,종이조공신소관EMT과정.
