食品科学
食品科學
식품과학
Food Science
2015年
20期
226-231
,共6页
王建昌%王金凤%段永生%李静%陈志敏%陈瑞春
王建昌%王金鳳%段永生%李靜%陳誌敏%陳瑞春
왕건창%왕금봉%단영생%리정%진지민%진서춘
大肠埃希氏菌O157:H7%rfbE%Flic%实时荧光定量PCR%内参
大腸埃希氏菌O157:H7%rfbE%Flic%實時熒光定量PCR%內參
대장애희씨균O157:H7%rfbE%Flic%실시형광정량PCR%내삼
E.coli O157:H7%rfbE%Flic%real-time quantitative PCR%internal amplification control (IAC)
针对大肠埃希氏菌O157:H7 rfbE和Flic靶基因保守序列,设计特异性引物和探针,优化反应体系,并加入内参(internal amplification control,IAC),建立能够实时监控反应过程的荧光定量聚合酶链式反应(polymease chain reaction,PCR)检测方法.结果表明,该方法对Ecoli O157:H7基因组DNA的最低检测限为1 pg/μL;对含有靶基因质粒的最低检测限为103 copies/μL;对细菌的最低检测限为5×103 CFM/mL;Ct值与模板拷贝数均呈良好的线性关系(R2=0.999).人工污染实验结果表明,在初始菌量为7 CFM/25 g时,采用水洗加试剂盒法提取DNA,E.coli O157:H7在增菌6h后即可检出;而采用水煮法提取DNA,则在增菌10 h后方可检出.建立的E.coli O157:H7实时荧光定量PCR方法,既能有效检测食品中O157:H7,又能实时监测PCR反应过程,有效防止"假阴性"的发生.
針對大腸埃希氏菌O157:H7 rfbE和Flic靶基因保守序列,設計特異性引物和探針,優化反應體繫,併加入內參(internal amplification control,IAC),建立能夠實時鑑控反應過程的熒光定量聚閤酶鏈式反應(polymease chain reaction,PCR)檢測方法.結果錶明,該方法對Ecoli O157:H7基因組DNA的最低檢測限為1 pg/μL;對含有靶基因質粒的最低檢測限為103 copies/μL;對細菌的最低檢測限為5×103 CFM/mL;Ct值與模闆拷貝數均呈良好的線性關繫(R2=0.999).人工汙染實驗結果錶明,在初始菌量為7 CFM/25 g時,採用水洗加試劑盒法提取DNA,E.coli O157:H7在增菌6h後即可檢齣;而採用水煮法提取DNA,則在增菌10 h後方可檢齣.建立的E.coli O157:H7實時熒光定量PCR方法,既能有效檢測食品中O157:H7,又能實時鑑測PCR反應過程,有效防止"假陰性"的髮生.
침대대장애희씨균O157:H7 rfbE화Flic파기인보수서렬,설계특이성인물화탐침,우화반응체계,병가입내삼(internal amplification control,IAC),건립능구실시감공반응과정적형광정량취합매련식반응(polymease chain reaction,PCR)검측방법.결과표명,해방법대Ecoli O157:H7기인조DNA적최저검측한위1 pg/μL;대함유파기인질립적최저검측한위103 copies/μL;대세균적최저검측한위5×103 CFM/mL;Ct치여모판고패수균정량호적선성관계(R2=0.999).인공오염실험결과표명,재초시균량위7 CFM/25 g시,채용수세가시제합법제취DNA,E.coli O157:H7재증균6h후즉가검출;이채용수자법제취DNA,칙재증균10 h후방가검출.건립적E.coli O157:H7실시형광정량PCR방법,기능유효검측식품중O157:H7,우능실시감측PCR반응과정,유효방지"가음성"적발생.
