食品科学
食品科學
식품과학
Food Science
2015年
19期
170-175
,共6页
重组蛋白%LuxS%诱导表达%纯化%自诱导物2
重組蛋白%LuxS%誘導錶達%純化%自誘導物2
중조단백%LuxS%유도표체%순화%자유도물2
recombinant protein%LuxS%induced expression%purification%autoinducer-2 (AI-2)
目的:优化重组蛋白LuxS诱导表达及纯化条件,提高具有生物活性的重组蛋白LuxS的表达量,为体外合成自诱导物2 (autoinducer-2,AI-2)奠定基础.方法:采用单因素试验,优化诱导培养基、诱导温度、诱导前菌体生物量、诱导时间以及异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)的浓度;采用Ni-NTAPurification System对重组蛋白进行纯化,比较Native Elution Buffer的咪唑浓度和pH值对重组蛋白纯化的影响,确定最佳的Native Elution Buffer;对比蛋白与树脂结合时不同缓冲液的纯化效果,选择最优的结合缓冲液.结果:重组蛋白的最佳诱导表达条件为:以LB培养基为诱导培养基,菌液OD600 nm为0.6～0.8,IPTG浓度为0.1 mmol/L,诱导温度为37℃,诱导时间为12h.采用添加3 mol/L NaC1的磷酸盐缓冲液作为蛋白与树脂结合的缓冲液,含500 mmol/L咪唑的Native Elution Buffer (pH 6.5)作为蛋白洗脱液.使用分离获得的LuxS蛋白合成的AI-2生物活性约为阳性对照的6倍.结论:本研究成功优化了重组蛋白LuxS的诱导表达及纯化条件,获得了具有生物活性的重组蛋白,并成功合成了AI-2.
目的:優化重組蛋白LuxS誘導錶達及純化條件,提高具有生物活性的重組蛋白LuxS的錶達量,為體外閤成自誘導物2 (autoinducer-2,AI-2)奠定基礎.方法:採用單因素試驗,優化誘導培養基、誘導溫度、誘導前菌體生物量、誘導時間以及異丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)的濃度;採用Ni-NTAPurification System對重組蛋白進行純化,比較Native Elution Buffer的咪唑濃度和pH值對重組蛋白純化的影響,確定最佳的Native Elution Buffer;對比蛋白與樹脂結閤時不同緩遲液的純化效果,選擇最優的結閤緩遲液.結果:重組蛋白的最佳誘導錶達條件為:以LB培養基為誘導培養基,菌液OD600 nm為0.6～0.8,IPTG濃度為0.1 mmol/L,誘導溫度為37℃,誘導時間為12h.採用添加3 mol/L NaC1的燐痠鹽緩遲液作為蛋白與樹脂結閤的緩遲液,含500 mmol/L咪唑的Native Elution Buffer (pH 6.5)作為蛋白洗脫液.使用分離穫得的LuxS蛋白閤成的AI-2生物活性約為暘性對照的6倍.結論:本研究成功優化瞭重組蛋白LuxS的誘導錶達及純化條件,穫得瞭具有生物活性的重組蛋白,併成功閤成瞭AI-2.
목적:우화중조단백LuxS유도표체급순화조건,제고구유생물활성적중조단백LuxS적표체량,위체외합성자유도물2 (autoinducer-2,AI-2)전정기출.방법:채용단인소시험,우화유도배양기、유도온도、유도전균체생물량、유도시간이급이병기류대반유당감(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)적농도;채용Ni-NTAPurification System대중조단백진행순화,비교Native Elution Buffer적미서농도화pH치대중조단백순화적영향,학정최가적Native Elution Buffer;대비단백여수지결합시불동완충액적순화효과,선택최우적결합완충액.결과:중조단백적최가유도표체조건위:이LB배양기위유도배양기,균액OD600 nm위0.6～0.8,IPTG농도위0.1 mmol/L,유도온도위37℃,유도시간위12h.채용첨가3 mol/L NaC1적린산염완충액작위단백여수지결합적완충액,함500 mmol/L미서적Native Elution Buffer (pH 6.5)작위단백세탈액.사용분리획득적LuxS단백합성적AI-2생물활성약위양성대조적6배.결론:본연구성공우화료중조단백LuxS적유도표체급순화조건,획득료구유생물활성적중조단백,병성공합성료AI-2.
