CAJ | 학술논문

PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株β毒素完整成熟肽序列,将942 bp的基因片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-32a(+)中,然后将重组质粒转化进宿主菌BL21 (DE3)中,在37℃1 mmol/L IPTG诱导下该片段获得良好表达.经SDS-PAGE分析,其表达的蛋白约为54.6ku,与预期值一致.Western blot显示,该重组蛋白可被C型产气荚膜梭菌血清识别,表明该重组蛋白具备与天然毒素相类似的反应原性.重组β毒素蛋白在菌液上清、超声波裂解上清和包涵体中均有分布,且以包涵体为主,表明重组蛋白可同时以胞外、周质和胞浆的形式表达.小鼠试验表明,重组β毒素蛋白不具有毒性.毒素-抗毒素中和试验表明,该抗血清具有β毒素特异性.以重组β毒素蛋白作为抗原免疫家兔,每0.1mL的一免、二免、三免后抗血清分别可以中和10、20、50个小鼠MLD的C型毒素.结果表明,试验所获得的重组菌株有望成为产气荚膜梭菌β类毒素生产的候选菌株,所制备的抗血清有望进一步研制成为抗β毒素国家标准品.
PCR확증B형산기협막사균C58-2주β독소완정성숙태서렬,장942 bp적기인편단이정학적열독광가정향극륭우pET-32a(+)중,연후장중조질립전화진숙주균BL21 (DE3)중,재37℃1 mmol/L IPTG유도하해편단획득량호표체.경SDS-PAGE분석,기표체적단백약위54.6ku,여예기치일치.Western blot현시,해중조단백가피C형산기협막사균혈청식별,표명해중조단백구비여천연독소상유사적반응원성.중조β독소단백재균액상청、초성파렬해상청화포함체중균유분포,차이포함체위주,표명중조단백가동시이포외、주질화포장적형식표체.소서시험표명,중조β독소단백불구유독성.독소-항독소중화시험표명,해항혈청구유β독소특이성.이중조β독소단백작위항원면역가토,매0.1mL적일면、이면、삼면후항혈청분별가이중화10、20、50개소서MLD적C형독소.결과표명,시험소획득적중조균주유망성위산기협막사균β류독소생산적후선균주,소제비적항혈청유망진일보연제성위항β독소국가표준품.