畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
Animal Husbandry & Veterinary Medicine
2015年
10期
82-85
,共4页
李文良%韩林晓%毛立%杨蕾蕾%张纹纹%江杰元
李文良%韓林曉%毛立%楊蕾蕾%張紋紋%江傑元
리문량%한림효%모립%양뢰뢰%장문문%강걸원
Viperin%原核表达%多克隆抗体%猪
Viperin%原覈錶達%多剋隆抗體%豬
Viperin%원핵표체%다극륭항체%저
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采用PCR方法扩增猪Viperin蛋白主要抗原区基因,克隆入原核表达载体pET32a,转化大肠杆菌BL21构建重组表达菌,经IPTG诱导表达重组蛋白,SDS-PAGE鉴定蛋白得到表达,分子质量约为40 ku.进一步优化蛋白表达条件为:IPTG终浓度为0.6 mmol/L,诱导5h.采用His标签单抗对重组蛋白进行Western blot鉴定表明蛋白具有良好的抗原性.将蛋白质纯化后免疫新西兰大白兔,间隔14 d免疫4次,并采集血清.用间接ELISA方法测定血清抗体效价,结果表明,经过4次免疫血清抗体效价达到1:409600,间接免疫荧光检测出现特异荧光,表明其能与Viperin蛋白发生反应.本试验为研究Viperin的功能、建立特异的检测方法奠定了基础.
採用PCR方法擴增豬Viperin蛋白主要抗原區基因,剋隆入原覈錶達載體pET32a,轉化大腸桿菌BL21構建重組錶達菌,經IPTG誘導錶達重組蛋白,SDS-PAGE鑒定蛋白得到錶達,分子質量約為40 ku.進一步優化蛋白錶達條件為:IPTG終濃度為0.6 mmol/L,誘導5h.採用His標籤單抗對重組蛋白進行Western blot鑒定錶明蛋白具有良好的抗原性.將蛋白質純化後免疫新西蘭大白兔,間隔14 d免疫4次,併採集血清.用間接ELISA方法測定血清抗體效價,結果錶明,經過4次免疫血清抗體效價達到1:409600,間接免疫熒光檢測齣現特異熒光,錶明其能與Viperin蛋白髮生反應.本試驗為研究Viperin的功能、建立特異的檢測方法奠定瞭基礎.
채용PCR방법확증저Viperin단백주요항원구기인,극륭입원핵표체재체pET32a,전화대장간균BL21구건중조표체균,경IPTG유도표체중조단백,SDS-PAGE감정단백득도표체,분자질량약위40 ku.진일보우화단백표체조건위:IPTG종농도위0.6 mmol/L,유도5h.채용His표첨단항대중조단백진행Western blot감정표명단백구유량호적항원성.장단백질순화후면역신서란대백토,간격14 d면역4차,병채집혈청.용간접ELISA방법측정혈청항체효개,결과표명,경과4차면역혈청항체효개체도1:409600,간접면역형광검측출현특이형광,표명기능여Viperin단백발생반응.본시험위연구Viperin적공능、건립특이적검측방법전정료기출.
