福建农业学报
福建農業學報
복건농업학보
Fujian Journal of Agricultural Sciences
2015年
8期
727-730
,共4页
李海琴%傅光华%黄瑜%韦启鹏%唐维国
李海琴%傅光華%黃瑜%韋啟鵬%唐維國
리해금%부광화%황유%위계붕%당유국
H5 亚型禽流感病毒%H9 亚型禽流感病毒%鸭坦布苏病毒%多重 PCR
H5 亞型禽流感病毒%H9 亞型禽流感病毒%鴨坦佈囌病毒%多重 PCR
H5 아형금류감병독%H9 아형금류감병독%압탄포소병독%다중 PCR
H5 AIV%H9 AIV%duck Tembusu virus%multiplex PCR
为建立一种能同时快速检测 H5、H9亚型禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）和鸭坦布苏病毒（duck Tembusu virus，DTMUV）的多重 PCR 检测方法，根据 GenBank 发表的 H5、H9亚型禽流感病毒（AIV） HA 基因和 DTMUV 的 NS5基因序列，分别设计了3对特异性引物，通过优化扩增条件，建立了同时检测 H5亚型 AIV、H9亚型 AIV 和 DTMUV 的多重 PCR 检测方法，对其特异性及敏感性进行检验，并在临床中进行初步应用。结果表明，该多重 PCR 方法具有良好的特异性和敏感性，可同时扩增出大小分别为732 bp （H9亚型AIV）、380 bp （H5亚型 AIV）、250 bp （DTMUV）的特异片段，利用本试验建立的多重 PCR 对其他鸭病病原体进行扩增结果均为阴性，利用这3对引物对 H5、H9亚型 AIV 和 DTMUV 进行敏感性检测，结果显示最低检测极限分别为533 pg·μL－1、56 pg·μL－1和6．6 ng·μL－1。对临床200份样品的检测结果表明该多重 PCR 检测方法具有快速、敏感、特异性强等优点，适用于临床检测应用。
為建立一種能同時快速檢測 H5、H9亞型禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）和鴨坦佈囌病毒（duck Tembusu virus，DTMUV）的多重 PCR 檢測方法，根據 GenBank 髮錶的 H5、H9亞型禽流感病毒（AIV） HA 基因和 DTMUV 的 NS5基因序列，分彆設計瞭3對特異性引物，通過優化擴增條件，建立瞭同時檢測 H5亞型 AIV、H9亞型 AIV 和 DTMUV 的多重 PCR 檢測方法，對其特異性及敏感性進行檢驗，併在臨床中進行初步應用。結果錶明，該多重 PCR 方法具有良好的特異性和敏感性，可同時擴增齣大小分彆為732 bp （H9亞型AIV）、380 bp （H5亞型 AIV）、250 bp （DTMUV）的特異片段，利用本試驗建立的多重 PCR 對其他鴨病病原體進行擴增結果均為陰性，利用這3對引物對 H5、H9亞型 AIV 和 DTMUV 進行敏感性檢測，結果顯示最低檢測極限分彆為533 pg·μL－1、56 pg·μL－1和6．6 ng·μL－1。對臨床200份樣品的檢測結果錶明該多重 PCR 檢測方法具有快速、敏感、特異性彊等優點，適用于臨床檢測應用。
위건립일충능동시쾌속검측 H5、H9아형금류감병독（avian influenza virus，AIV）화압탄포소병독（duck Tembusu virus，DTMUV）적다중 PCR 검측방법，근거 GenBank 발표적 H5、H9아형금류감병독（AIV） HA 기인화 DTMUV 적 NS5기인서렬，분별설계료3대특이성인물，통과우화확증조건，건립료동시검측 H5아형 AIV、H9아형 AIV 화 DTMUV 적다중 PCR 검측방법，대기특이성급민감성진행검험，병재림상중진행초보응용。결과표명，해다중 PCR 방법구유량호적특이성화민감성，가동시확증출대소분별위732 bp （H9아형AIV）、380 bp （H5아형 AIV）、250 bp （DTMUV）적특이편단，이용본시험건립적다중 PCR 대기타압병병원체진행확증결과균위음성，이용저3대인물대 H5、H9아형 AIV 화 DTMUV 진행민감성검측，결과현시최저검측겁한분별위533 pg·μL－1、56 pg·μL－1화6．6 ng·μL－1。대림상200빈양품적검측결과표명해다중 PCR 검측방법구유쾌속、민감、특이성강등우점，괄용우림상검측응용。
The aim of this study is to establish a rapid multiplex PCR assay for detection of H5,H9 subtype avian influenza virus (AIV)and duck Tembusu virus (DTMUV). According to the HA gene sequences of H5 and H9 AIV and NS5 gene of DTMUV in GenBank,three primer sets specific to these three kinds of viruses were designed,respectively. The multiplex PCR for simultaneous detection of AIV (H5,H9 )and DTMUV was established,and was applied to clinical testing for three kinds of viruses. The specificity and sensitivity of the multiplex PCR were tested. The results showed that the assay could specifically amplify the gene fragments of H5 AIV (380 bp),H9 AIV (732 bp),and DTMUV (250 bp),and were all negative for detection of other duck viruses.This method showed a sensitive of 533 pg·μL-1 for H5 AIV,56 pg·μL-1 for H9,and 6.6 ng·μL-1 for DTMUV.Additionally,the detection results of 200 clinical samples indicated that this multiplex PCR method proved a a rapid,sensitive and specific tool for clinical samples detection.
