中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
Acta Academiae Medicinae Sinicae
2015年
4期
456-465
,共10页
江潮%李大鹏%张志坚%束浩明%胡浪%李正南%黄永辉
江潮%李大鵬%張誌堅%束浩明%鬍浪%李正南%黃永輝
강조%리대붕%장지견%속호명%호랑%리정남%황영휘
碱性成纤维细胞生长因子%转化生长因子-β1%骨髓间充质干细胞%温敏性壳聚糖%腺病毒%椎间盘退变
堿性成纖維細胞生長因子%轉化生長因子-β1%骨髓間充質榦細胞%溫敏性殼聚糖%腺病毒%椎間盤退變
감성성섬유세포생장인자%전화생장인자-β1%골수간충질간세포%온민성각취당%선병독%추간반퇴변
basic fibroblast growth factor%transforming growth factor-β1%bone marrow mesenchymal stem cell%temperature-responsive chitosan%adenovirus%intervertebral disc degeneration
目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)复合骨髓间充质干细胞(BMSCs)以温敏性壳聚糖(TCH)为载体对大鼠退变椎间盘的修复作用.方法 针刺法建立SD大鼠椎间盘退变模型,4周后核磁共振下观察退变效果.体外培养BMSCs,并用含增强型绿色荧光蛋白的腺病毒转染使带有增强型绿色荧光蛋白基因,作荧光标记.将椎间盘退变的SD大鼠分成4组,实验组A组使用bFGF+ TGF-β1+ BMSCs+ TCH凝胶移植入退变的椎间盘中,B组和C组分别使用BMSCs+ TCH凝胶和bFGF +TGF-β1+ TCH凝胶,对照组D组使用PBS缓冲液.继续培养4周后核磁共振观察各组椎间盘的修复情况.HE、Masson染色、组织病理学观察各组椎间盘结构.逆转录PCR,Western blot检测各组髓核蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、Sox-9、Ⅰ型胶原的表达.结果 移植注射的BMSCs能在椎间盘中生长,呈类髓核分化.核磁共振结果显示:A组髓核信号明显高于其他3组,B组高于C组,D组髓核信号最低,硬脊膜受压,脊髓呈串珠状改变,各组间Pfirrmann分级结果差异有统计学意义(P＜0.05).HE、Masson染色显示:A组椎间盘结构完整,髓核细胞数量优于其他3组,髓核和纤维环界限清楚,B组髓核数量多于C组,B组纤维环未见断裂,而C组可见断裂的纤维环,D组髓核细胞被杂乱的纤维组织取代.逆转录PCR、Western blot显示:A组蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、Sox-9的表达最高,B组优于C组,D组表达最低(P＜0.05).而Ⅰ型胶原的表达在4组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 移植的BMSCs在退变椎间盘中能够存活,呈类髓核分化.bFGF+ TGF-β1+ BMSCs+ TCH凝胶复合体对退变的椎间盘具有明显修复作用.BMSCs+ TCH凝胶治疗退变椎间盘的效果优于bFGF+ TGF-β1+ TCH凝胶但低于bFGF+ TGF-β1+ BMSCs+TCH凝胶复合体.
目的 探討堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)和轉化生長因子-β1(TGF-β1)複閤骨髓間充質榦細胞(BMSCs)以溫敏性殼聚糖(TCH)為載體對大鼠退變椎間盤的脩複作用.方法 針刺法建立SD大鼠椎間盤退變模型,4週後覈磁共振下觀察退變效果.體外培養BMSCs,併用含增彊型綠色熒光蛋白的腺病毒轉染使帶有增彊型綠色熒光蛋白基因,作熒光標記.將椎間盤退變的SD大鼠分成4組,實驗組A組使用bFGF+ TGF-β1+ BMSCs+ TCH凝膠移植入退變的椎間盤中,B組和C組分彆使用BMSCs+ TCH凝膠和bFGF +TGF-β1+ TCH凝膠,對照組D組使用PBS緩遲液.繼續培養4週後覈磁共振觀察各組椎間盤的脩複情況.HE、Masson染色、組織病理學觀察各組椎間盤結構.逆轉錄PCR,Western blot檢測各組髓覈蛋白聚糖、Ⅱ型膠原、Sox-9、Ⅰ型膠原的錶達.結果 移植註射的BMSCs能在椎間盤中生長,呈類髓覈分化.覈磁共振結果顯示:A組髓覈信號明顯高于其他3組,B組高于C組,D組髓覈信號最低,硬脊膜受壓,脊髓呈串珠狀改變,各組間Pfirrmann分級結果差異有統計學意義(P＜0.05).HE、Masson染色顯示:A組椎間盤結構完整,髓覈細胞數量優于其他3組,髓覈和纖維環界限清楚,B組髓覈數量多于C組,B組纖維環未見斷裂,而C組可見斷裂的纖維環,D組髓覈細胞被雜亂的纖維組織取代.逆轉錄PCR、Western blot顯示:A組蛋白聚糖、Ⅱ型膠原、Sox-9的錶達最高,B組優于C組,D組錶達最低(P＜0.05).而Ⅰ型膠原的錶達在4組之間差異無統計學意義(P＞0.05).結論 移植的BMSCs在退變椎間盤中能夠存活,呈類髓覈分化.bFGF+ TGF-β1+ BMSCs+ TCH凝膠複閤體對退變的椎間盤具有明顯脩複作用.BMSCs+ TCH凝膠治療退變椎間盤的效果優于bFGF+ TGF-β1+ TCH凝膠但低于bFGF+ TGF-β1+ BMSCs+TCH凝膠複閤體.
목적 탐토감성성섬유세포생장인자(bFGF)화전화생장인자-β1(TGF-β1)복합골수간충질간세포(BMSCs)이온민성각취당(TCH)위재체대대서퇴변추간반적수복작용.방법 침자법건립SD대서추간반퇴변모형,4주후핵자공진하관찰퇴변효과.체외배양BMSCs,병용함증강형록색형광단백적선병독전염사대유증강형록색형광단백기인,작형광표기.장추간반퇴변적SD대서분성4조,실험조A조사용bFGF+ TGF-β1+ BMSCs+ TCH응효이식입퇴변적추간반중,B조화C조분별사용BMSCs+ TCH응효화bFGF +TGF-β1+ TCH응효,대조조D조사용PBS완충액.계속배양4주후핵자공진관찰각조추간반적수복정황.HE、Masson염색、조직병이학관찰각조추간반결구.역전록PCR,Western blot검측각조수핵단백취당、Ⅱ형효원、Sox-9、Ⅰ형효원적표체.결과 이식주사적BMSCs능재추간반중생장,정류수핵분화.핵자공진결과현시:A조수핵신호명현고우기타3조,B조고우C조,D조수핵신호최저,경척막수압,척수정천주상개변,각조간Pfirrmann분급결과차이유통계학의의(P＜0.05).HE、Masson염색현시:A조추간반결구완정,수핵세포수량우우기타3조,수핵화섬유배계한청초,B조수핵수량다우C조,B조섬유배미견단렬,이C조가견단렬적섬유배,D조수핵세포피잡란적섬유조직취대.역전록PCR、Western blot현시:A조단백취당、Ⅱ형효원、Sox-9적표체최고,B조우우C조,D조표체최저(P＜0.05).이Ⅰ형효원적표체재4조지간차이무통계학의의(P＞0.05).결론 이식적BMSCs재퇴변추간반중능구존활,정류수핵분화.bFGF+ TGF-β1+ BMSCs+ TCH응효복합체대퇴변적추간반구유명현수복작용.BMSCs+ TCH응효치료퇴변추간반적효과우우bFGF+ TGF-β1+ TCH응효단저우bFGF+ TGF-β1+ BMSCs+TCH응효복합체.
