浙江农林大学学报
浙江農林大學學報
절강농림대학학보
Journal of Zhejiang A&F University
2015年
5期
749-755
,共7页
王超莉%张智俊%屈亚平%王蕾
王超莉%張智俊%屈亞平%王蕾
왕초리%장지준%굴아평%왕뢰
植物学%毛竹%丙酮酸磷酸双激酶调节蛋白%基因克隆%原核表达%蛋白纯化
植物學%毛竹%丙酮痠燐痠雙激酶調節蛋白%基因剋隆%原覈錶達%蛋白純化
식물학%모죽%병동산린산쌍격매조절단백%기인극륭%원핵표체%단백순화
botany%Phyllostachys edulis%pyruvate,orthophosphate dikinase regulatory proteins%gene cloning%prokaryotic expression%protein purification
丙酮酸磷酸双激酶调节蛋白(pyruvate,orthophosphate dikinase regulatory proteins,RP)是通过调控丙酮酸磷酸双激酶(pyruvate,orthophosphate dikinase,PPDK)参与C4途径光合碳循环途径.毛竹Phyllostachys edulis作为一种重要的经济竹种,分析克隆RP基因对于竹类植物光合作用的研究具有重大理论和应用价值.通过逆转录实时聚合酶链式反应(RT-PCR)成功克隆得到毛竹PeRP1,该基因cDNA全长1 275 bp,编码425个氨基酸;经生物信息学预测,该蛋白属于kinase-PPPase超家族,主要含有UDF 299保守结构域;经多序列比对发现毛竹PeRP1蛋白与C3植物中RP1亲缘关系较近,而与C4植物亲缘关系较远.为了研究PeRP1的蛋白质结构,我们将PeRP1蛋白进行原核表达,利用Ni-NTA树脂亲和层析结合分子筛(SEC)层析的方法纯化得到了PeRP1重组蛋白.SEC纯化的结果表明:PeRP1蛋白在溶液中主要以多聚体形式存在,二聚体及单体含量较少,推测PeRP1蛋白可能以多聚体形式参与调控PPDK蛋白.这为今后研究该蛋白的结构与功能打下了良好基础.
丙酮痠燐痠雙激酶調節蛋白(pyruvate,orthophosphate dikinase regulatory proteins,RP)是通過調控丙酮痠燐痠雙激酶(pyruvate,orthophosphate dikinase,PPDK)參與C4途徑光閤碳循環途徑.毛竹Phyllostachys edulis作為一種重要的經濟竹種,分析剋隆RP基因對于竹類植物光閤作用的研究具有重大理論和應用價值.通過逆轉錄實時聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)成功剋隆得到毛竹PeRP1,該基因cDNA全長1 275 bp,編碼425箇氨基痠;經生物信息學預測,該蛋白屬于kinase-PPPase超傢族,主要含有UDF 299保守結構域;經多序列比對髮現毛竹PeRP1蛋白與C3植物中RP1親緣關繫較近,而與C4植物親緣關繫較遠.為瞭研究PeRP1的蛋白質結構,我們將PeRP1蛋白進行原覈錶達,利用Ni-NTA樹脂親和層析結閤分子篩(SEC)層析的方法純化得到瞭PeRP1重組蛋白.SEC純化的結果錶明:PeRP1蛋白在溶液中主要以多聚體形式存在,二聚體及單體含量較少,推測PeRP1蛋白可能以多聚體形式參與調控PPDK蛋白.這為今後研究該蛋白的結構與功能打下瞭良好基礎.
병동산린산쌍격매조절단백(pyruvate,orthophosphate dikinase regulatory proteins,RP)시통과조공병동산린산쌍격매(pyruvate,orthophosphate dikinase,PPDK)삼여C4도경광합탄순배도경.모죽Phyllostachys edulis작위일충중요적경제죽충,분석극륭RP기인대우죽류식물광합작용적연구구유중대이론화응용개치.통과역전록실시취합매련식반응(RT-PCR)성공극륭득도모죽PeRP1,해기인cDNA전장1 275 bp,편마425개안기산;경생물신식학예측,해단백속우kinase-PPPase초가족,주요함유UDF 299보수결구역;경다서렬비대발현모죽PeRP1단백여C3식물중RP1친연관계교근,이여C4식물친연관계교원.위료연구PeRP1적단백질결구,아문장PeRP1단백진행원핵표체,이용Ni-NTA수지친화층석결합분자사(SEC)층석적방법순화득도료PeRP1중조단백.SEC순화적결과표명:PeRP1단백재용액중주요이다취체형식존재,이취체급단체함량교소,추측PeRP1단백가능이다취체형식삼여조공PPDK단백.저위금후연구해단백적결구여공능타하료량호기출.
