CAJ | 학술논문

采用5种方法提取蚕沙堆肥中微生物总DNA，测定粗提液的吸光值，进一步利用通用引物对细菌16 S rDNA 基因V4可变区和真菌ITS区进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳分析，最后对不同方法的提取效果进行综合比较。结果表明，只有Magen D3142-02试剂盒法和SDS-高盐缓冲液法成功提取了蚕沙总DNA，得率分别为26.5和11.0μg/g FW，A260/A280值分别为1.711和1.652，A260/A230值分别为1.568和2.239。琼脂糖凝胶电泳检测显示，从两种方法提取的DNA中均扩增出了细菌16 S rDNA基因V4可变区和真菌ITS区特异片段，片段长度符合预期大小（≈300 bp）。说明两种方法均适用于蚕沙微生物总DNA的提取，前者抽提的DNA在得率和速率上具有明显优势，不足之处是价格偏贵；后者抽提的DNA纯度稍高，成本低廉，但操作非常繁琐，适用于大规模样本的提取。本研究为后续蚕沙堆肥微生物分子生物学研究提供了理论和技术参考。
채용5충방법제취잠사퇴비중미생물총DNA，측정조제액적흡광치，진일보이용통용인물대세균16 S rDNA 기인V4가변구화진균ITS구진행PCR확증，대확증산물진행전영분석，최후대불동방법적제취효과진행종합비교。결과표명，지유Magen D3142-02시제합법화SDS-고염완충액법성공제취료잠사총DNA，득솔분별위26.5화11.0μg/g FW，A260/A280치분별위1.711화1.652，A260/A230치분별위1.568화2.239。경지당응효전영검측현시，종량충방법제취적DNA중균확증출료세균16 S rDNA기인V4가변구화진균ITS구특이편단，편단장도부합예기대소（≈300 bp）。설명량충방법균괄용우잠사미생물총DNA적제취，전자추제적DNA재득솔화속솔상구유명현우세，불족지처시개격편귀；후자추제적DNA순도초고，성본저렴，단조작비상번쇄，괄용우대규모양본적제취。본연구위후속잠사퇴비미생물분자생물학연구제공료이론화기술삼고。