南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
Journal of Southern Agriculture
2015年
7期
1147-1153
,共7页
黄昕颖%程祖锌%肖长春%黄志伟%郑金贵
黃昕穎%程祖鋅%肖長春%黃誌偉%鄭金貴
황흔영%정조자%초장춘%황지위%정금귀
Ole18启动子%基因克隆%序列分析%功能验证
Ole18啟動子%基因剋隆%序列分析%功能驗證
Ole18계동자%기인극륭%서렬분석%공능험증
Ole18 promoter%gene cloning%sequence analysis%function identification
[目的]克隆水稻种子特异表达启动子Ole18,为实现外源基因在水稻胚、糊粉层特异表达奠定基础.[方法]采用PCR克隆扬稻6号Ole18启动子序列,并连接至pMD20-T载体上,经PCR验证后进行测序,并对测序结果进行生物信息学分析;用克隆获得的Ole18启动子取代pCAMBIA1301载体中GUS基因上游的CaMV35S启动子构建重组表达载体,经农杆菌介导转化台粳9号,获得转基因植株,对其种子进行GUS染色.[结果]克隆获得大小为1261bp的Ole18启动子序列,与japonica cultivar-group、IR36的18 kD Oleosi基因启动子同源性为99％.启动子预测软件NNPP推测该序列具有启动子的功能,含有种子特异表达启动子所必需的TATA-box、CAAT-box等顺式调控元件.GUS组织化学染色结果表明,该启动子序列能够驱动GUS基因在水稻种子胚及糊粉层中表达.[结论]克隆获得的Ole18启动子具有启动活性,且具有胚及糊粉层特异性表达功能.
[目的]剋隆水稻種子特異錶達啟動子Ole18,為實現外源基因在水稻胚、糊粉層特異錶達奠定基礎.[方法]採用PCR剋隆颺稻6號Ole18啟動子序列,併連接至pMD20-T載體上,經PCR驗證後進行測序,併對測序結果進行生物信息學分析;用剋隆穫得的Ole18啟動子取代pCAMBIA1301載體中GUS基因上遊的CaMV35S啟動子構建重組錶達載體,經農桿菌介導轉化檯粳9號,穫得轉基因植株,對其種子進行GUS染色.[結果]剋隆穫得大小為1261bp的Ole18啟動子序列,與japonica cultivar-group、IR36的18 kD Oleosi基因啟動子同源性為99％.啟動子預測軟件NNPP推測該序列具有啟動子的功能,含有種子特異錶達啟動子所必需的TATA-box、CAAT-box等順式調控元件.GUS組織化學染色結果錶明,該啟動子序列能夠驅動GUS基因在水稻種子胚及糊粉層中錶達.[結論]剋隆穫得的Ole18啟動子具有啟動活性,且具有胚及糊粉層特異性錶達功能.
[목적]극륭수도충자특이표체계동자Ole18,위실현외원기인재수도배、호분층특이표체전정기출.[방법]채용PCR극륭양도6호Ole18계동자서렬,병련접지pMD20-T재체상,경PCR험증후진행측서,병대측서결과진행생물신식학분석;용극륭획득적Ole18계동자취대pCAMBIA1301재체중GUS기인상유적CaMV35S계동자구건중조표체재체,경농간균개도전화태갱9호,획득전기인식주,대기충자진행GUS염색.[결과]극륭획득대소위1261bp적Ole18계동자서렬,여japonica cultivar-group、IR36적18 kD Oleosi기인계동자동원성위99％.계동자예측연건NNPP추측해서렬구유계동자적공능,함유충자특이표체계동자소필수적TATA-box、CAAT-box등순식조공원건.GUS조직화학염색결과표명,해계동자서렬능구구동GUS기인재수도충자배급호분층중표체.[결론]극륭획득적Ole18계동자구유계동활성,차구유배급호분층특이성표체공능.
