南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
Journal of Southern Agriculture
2015年
7期
1310-1314
,共5页
胡巧云%袁小宁%熊毅%何奇松%黄胜斌%孙翔翔%吴军%颜健华%冯淑萍
鬍巧雲%袁小寧%熊毅%何奇鬆%黃勝斌%孫翔翔%吳軍%顏健華%馮淑萍
호교운%원소저%웅의%하기송%황성빈%손상상%오군%안건화%풍숙평
2型猪链球菌%SspA基因%分段表达%免疫原性
2型豬鏈毬菌%SspA基因%分段錶達%免疫原性
2형저련구균%SspA기인%분단표체%면역원성
S.suis 2%SspA gene%segmented expression%immunogenicity
[目的]明确2型猪链球菌的枯草杆菌素样丝氨酸蛋白酶(SspA)基因序列特征及其原核表达重组蛋白的免疫原性,为2型猪链球菌病的诊断及疫苗研究奠定基础.[方法]针对SspA基因上、下游序列分别设计1对引物,从112株2型猪链球菌临床分离株中扩增其相应片段,并进行测序分析;同时以SspA基因的重组质粒pET28a-SspN、pET28a-SspM和pET28a-SspC分别转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,再以SDS-PAGE检测融合蛋白表达情况,Western blotting鉴定其免疫原性.[结果]SspA基因上游片段较保守,而下游片段变异区间较大.在IPTG诱导下,含有重组质粒pET28a-SspN、pET28a-SspM和pET28a-SspC的菌株表达出3段融合蛋白,其中,SspN和SspC重组蛋白存在于破碎菌体的上清液中,而SspM重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀中,其大小为:SspN重组蛋白66 kD,SspM重组蛋白65 kD,SspC重组蛋白32 kD.Western blotting鉴定结果显示,3段重组蛋白均能与2型猪链球菌感染血清发生反应,且以SspN重组蛋白反应最强烈,而与以全菌灭活苗制备的猪血清未发生特异性反应.[结论]2型猪链球菌SspA基因上游片段较保守,经大肠杆菌重组表达的SspN蛋白免疫原性较强,且具备鉴别2型猪链球菌感染与免疫的潜力,可作为研究猪链球菌病血清学诊断的候选抗原片段.
[目的]明確2型豬鏈毬菌的枯草桿菌素樣絲氨痠蛋白酶(SspA)基因序列特徵及其原覈錶達重組蛋白的免疫原性,為2型豬鏈毬菌病的診斷及疫苗研究奠定基礎.[方法]針對SspA基因上、下遊序列分彆設計1對引物,從112株2型豬鏈毬菌臨床分離株中擴增其相應片段,併進行測序分析;同時以SspA基因的重組質粒pET28a-SspN、pET28a-SspM和pET28a-SspC分彆轉化感受態大腸桿菌BL21(DE3)後經IPTG誘導錶達,再以SDS-PAGE檢測融閤蛋白錶達情況,Western blotting鑒定其免疫原性.[結果]SspA基因上遊片段較保守,而下遊片段變異區間較大.在IPTG誘導下,含有重組質粒pET28a-SspN、pET28a-SspM和pET28a-SspC的菌株錶達齣3段融閤蛋白,其中,SspN和SspC重組蛋白存在于破碎菌體的上清液中,而SspM重組蛋白以包涵體形式存在于沉澱中,其大小為:SspN重組蛋白66 kD,SspM重組蛋白65 kD,SspC重組蛋白32 kD.Western blotting鑒定結果顯示,3段重組蛋白均能與2型豬鏈毬菌感染血清髮生反應,且以SspN重組蛋白反應最彊烈,而與以全菌滅活苗製備的豬血清未髮生特異性反應.[結論]2型豬鏈毬菌SspA基因上遊片段較保守,經大腸桿菌重組錶達的SspN蛋白免疫原性較彊,且具備鑒彆2型豬鏈毬菌感染與免疫的潛力,可作為研究豬鏈毬菌病血清學診斷的候選抗原片段.
[목적]명학2형저련구균적고초간균소양사안산단백매(SspA)기인서렬특정급기원핵표체중조단백적면역원성,위2형저련구균병적진단급역묘연구전정기출.[방법]침대SspA기인상、하유서렬분별설계1대인물,종112주2형저련구균림상분리주중확증기상응편단,병진행측서분석;동시이SspA기인적중조질립pET28a-SspN、pET28a-SspM화pET28a-SspC분별전화감수태대장간균BL21(DE3)후경IPTG유도표체,재이SDS-PAGE검측융합단백표체정황,Western blotting감정기면역원성.[결과]SspA기인상유편단교보수,이하유편단변이구간교대.재IPTG유도하,함유중조질립pET28a-SspN、pET28a-SspM화pET28a-SspC적균주표체출3단융합단백,기중,SspN화SspC중조단백존재우파쇄균체적상청액중,이SspM중조단백이포함체형식존재우침정중,기대소위:SspN중조단백66 kD,SspM중조단백65 kD,SspC중조단백32 kD.Western blotting감정결과현시,3단중조단백균능여2형저련구균감염혈청발생반응,차이SspN중조단백반응최강렬,이여이전균멸활묘제비적저혈청미발생특이성반응.[결론]2형저련구균SspA기인상유편단교보수,경대장간균중조표체적SspN단백면역원성교강,차구비감별2형저련구균감염여면역적잠력,가작위연구저련구균병혈청학진단적후선항원편단.
