中国血吸虫病防治杂志
中國血吸蟲病防治雜誌
중국혈흡충병방치잡지
Chinese Journal of Schistosomiasis Control
2015年
4期
376-380
,共5页
陈英%奥·乌力吉%张颋%吴群峰%党志胜%陈军虎%胡薇
陳英%奧·烏力吉%張颋%吳群峰%黨誌勝%陳軍虎%鬍薇
진영%오·오력길%장정%오군봉%당지성%진군호%호미
细粒棘球绦虫%丙酮酸脱氢酶%克隆%表达%生物信息学
細粒棘毬縚蟲%丙酮痠脫氫酶%剋隆%錶達%生物信息學
세립극구조충%병동산탈경매%극륭%표체%생물신식학
Echinococcus granulosus%Pyruvate dehydrogenase%Cloning%Expression%Bioinformatics
目的 克隆表达细粒棘球绦虫丙酮酸脱氢酶(EgPDH)基因,并对其进行生物信息学预测与分析.方法 提取细粒棘球绦虫Total-RNA并反转录成cDNA,以此为模板扩增目的基因.将目的基因连接至pET28b构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行重组表达.采用SignalP4.1、TMHMMsever v.2.0和TargetP 1.1对EgPDH编码蛋白序列分别进行信号肽、跨膜区及亚细胞定位的预测.采用SMART分析EgPDH编码蛋白结构域,用BLASTP和GeneDoc进行EgPDH同源序列比对及保守位点分析,并采用MEGA6软件邻接法构建系统进化树.结果 成功克隆并构建重组质粒pET28b-EgPDH,目的基因大小约1 080 bp,重组蛋白以可溶性形式表达.EgPDH为信号肽的分泌蛋白,并含转酮酶结构域,其高度保守酶活性位点分别为Glu57、Leu22、Iie86、Phe114.系统进化树分析显示EgPDH与多房棘球绦虫PDH亲缘关系最近.结论 成功克隆表达了细粒棘球绦虫EgPDH基因并进行了生物信息学预测分析,为进一步研究该蛋白功能奠定了基础.
目的 剋隆錶達細粒棘毬縚蟲丙酮痠脫氫酶(EgPDH)基因,併對其進行生物信息學預測與分析.方法 提取細粒棘毬縚蟲Total-RNA併反轉錄成cDNA,以此為模闆擴增目的基因.將目的基因連接至pET28b構建重組質粒併轉化大腸桿菌BL21(DE3)進行重組錶達.採用SignalP4.1、TMHMMsever v.2.0和TargetP 1.1對EgPDH編碼蛋白序列分彆進行信號肽、跨膜區及亞細胞定位的預測.採用SMART分析EgPDH編碼蛋白結構域,用BLASTP和GeneDoc進行EgPDH同源序列比對及保守位點分析,併採用MEGA6軟件鄰接法構建繫統進化樹.結果 成功剋隆併構建重組質粒pET28b-EgPDH,目的基因大小約1 080 bp,重組蛋白以可溶性形式錶達.EgPDH為信號肽的分泌蛋白,併含轉酮酶結構域,其高度保守酶活性位點分彆為Glu57、Leu22、Iie86、Phe114.繫統進化樹分析顯示EgPDH與多房棘毬縚蟲PDH親緣關繫最近.結論 成功剋隆錶達瞭細粒棘毬縚蟲EgPDH基因併進行瞭生物信息學預測分析,為進一步研究該蛋白功能奠定瞭基礎.
목적 극륭표체세립극구조충병동산탈경매(EgPDH)기인,병대기진행생물신식학예측여분석.방법 제취세립극구조충Total-RNA병반전록성cDNA,이차위모판확증목적기인.장목적기인련접지pET28b구건중조질립병전화대장간균BL21(DE3)진행중조표체.채용SignalP4.1、TMHMMsever v.2.0화TargetP 1.1대EgPDH편마단백서렬분별진행신호태、과막구급아세포정위적예측.채용SMART분석EgPDH편마단백결구역,용BLASTP화GeneDoc진행EgPDH동원서렬비대급보수위점분석,병채용MEGA6연건린접법구건계통진화수.결과 성공극륭병구건중조질립pET28b-EgPDH,목적기인대소약1 080 bp,중조단백이가용성형식표체.EgPDH위신호태적분비단백,병함전동매결구역,기고도보수매활성위점분별위Glu57、Leu22、Iie86、Phe114.계통진화수분석현시EgPDH여다방극구조충PDH친연관계최근.결론 성공극륭표체료세립극구조충EgPDH기인병진행료생물신식학예측분석,위진일보연구해단백공능전정료기출.
