北京农学院学报
北京農學院學報
북경농학원학보
Journal of Beijing University OF Agriculture
2015年
4期
9-14
,共6页
彭博%师光禄%卜春亚%王有年
彭博%師光祿%蔔春亞%王有年
팽박%사광록%복춘아%왕유년
乙酰胆碱酯酶%朱砂叶螨%发酵%正交试验%方差分析%最适反应条件
乙酰膽堿酯酶%硃砂葉螨%髮酵%正交試驗%方差分析%最適反應條件
을선담감지매%주사협만%발효%정교시험%방차분석%최괄반응조건
Acetylcholinesterase%Tetranychus cinnabarinus%fermentation%orthogonal experiment%analysis of variance%the optimum reaction conditions
乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是生物体内保证神经信号正常传递的关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的作用靶标.现研究拟采用发酵罐培养含pET-30a/ace的表达菌株E.coli BL21 (DE3),大量表达纯化螨AChE,利用单因素试验和正交试验优化AChE活性的测定条件.结果表明:发酵培养的重组菌株大量表达约为68 kD的朱砂叶螨AChE蛋白.底物浓度、温度、pH和酶浓度等各测定因素对朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性存在显著影响.确定朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性测定的最佳反应条件为:底物浓度1 mmol/L,pH值7,温度35℃,酶浓度0.5 mg/mL.通过体外发酵培养纯化获得了大量的朱砂叶螨AChE重组蛋白,确定了螨AChE活性测定的最佳条件,为进一步研究其酶学性质以及AChE抑制剂的体外筛选奠定基础.
乙酰膽堿酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是生物體內保證神經信號正常傳遞的關鍵酶,是有機燐和氨基甲痠酯類農藥的作用靶標.現研究擬採用髮酵罐培養含pET-30a/ace的錶達菌株E.coli BL21 (DE3),大量錶達純化螨AChE,利用單因素試驗和正交試驗優化AChE活性的測定條件.結果錶明:髮酵培養的重組菌株大量錶達約為68 kD的硃砂葉螨AChE蛋白.底物濃度、溫度、pH和酶濃度等各測定因素對硃砂葉螨乙酰膽堿酯酶活性存在顯著影響.確定硃砂葉螨乙酰膽堿酯酶活性測定的最佳反應條件為:底物濃度1 mmol/L,pH值7,溫度35℃,酶濃度0.5 mg/mL.通過體外髮酵培養純化穫得瞭大量的硃砂葉螨AChE重組蛋白,確定瞭螨AChE活性測定的最佳條件,為進一步研究其酶學性質以及AChE抑製劑的體外篩選奠定基礎.
을선담감지매(Acetylcholinesterase,AChE)시생물체내보증신경신호정상전체적관건매,시유궤린화안기갑산지류농약적작용파표.현연구의채용발효관배양함pET-30a/ace적표체균주E.coli BL21 (DE3),대량표체순화만AChE,이용단인소시험화정교시험우화AChE활성적측정조건.결과표명:발효배양적중조균주대량표체약위68 kD적주사협만AChE단백.저물농도、온도、pH화매농도등각측정인소대주사협만을선담감지매활성존재현저영향.학정주사협만을선담감지매활성측정적최가반응조건위:저물농도1 mmol/L,pH치7,온도35℃,매농도0.5 mg/mL.통과체외발효배양순화획득료대량적주사협만AChE중조단백,학정료만AChE활성측정적최가조건,위진일보연구기매학성질이급AChE억제제적체외사선전정기출.
