北京农学院学报
北京農學院學報
북경농학원학보
Journal of Beijing University OF Agriculture
2015年
4期
74-77
,共4页
李雪明%于红欣%杨红杰%王俊%周双海
李雪明%于紅訢%楊紅傑%王俊%週雙海
리설명%우홍흔%양홍걸%왕준%주쌍해
伪狂犬病病毒%gE基因%荧光定量PCR%伪狂犬病病毒野毒
偽狂犬病病毒%gE基因%熒光定量PCR%偽狂犬病病毒野毒
위광견병병독%gE기인%형광정량PCR%위광견병병독야독
pseudorabies virus%gE gene%fluorescent quantitative PCR%wild-type PRV
伪狂犬病病毒(PRV)野毒有gE基因,而其疫苗毒株无gE基因,这为检测有无PRV野毒感染提供参考.用PCR方法扩增PRV的gE基因片段,构建含有PRV gE基因片段的重组质粒.以系列稀释后的重组质粒作为模板,应用SYBR Green I来进行检测PRV gE基因的实时荧光定量PCR扩增.结果显示:在(6.9×107～6.9×101) copies/μL范围内,相邻扩增曲线之间间距均匀,所有产物具有单一整齐的熔解曲线峰,标准曲线具有优良的线性关系.该方法最低可准确检测69 copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于2％,对PRV-gE基因缺失疫苗毒株和常见猪源DNA病毒的检测结果均为阴性,对临床样品的检出率高于常规PCR方法.研究结果表明,建立了1种特异性强、灵敏度高、重复性好的检测PRV gE基因的SYBR Green I荧光定量PCR方法,可用于PRV野毒感染的定量检测.
偽狂犬病病毒(PRV)野毒有gE基因,而其疫苗毒株無gE基因,這為檢測有無PRV野毒感染提供參攷.用PCR方法擴增PRV的gE基因片段,構建含有PRV gE基因片段的重組質粒.以繫列稀釋後的重組質粒作為模闆,應用SYBR Green I來進行檢測PRV gE基因的實時熒光定量PCR擴增.結果顯示:在(6.9×107～6.9×101) copies/μL範圍內,相鄰擴增麯線之間間距均勻,所有產物具有單一整齊的鎔解麯線峰,標準麯線具有優良的線性關繫.該方法最低可準確檢測69 copies/μL的覈痠模闆,重複性試驗的變異繫數小于2％,對PRV-gE基因缺失疫苗毒株和常見豬源DNA病毒的檢測結果均為陰性,對臨床樣品的檢齣率高于常規PCR方法.研究結果錶明,建立瞭1種特異性彊、靈敏度高、重複性好的檢測PRV gE基因的SYBR Green I熒光定量PCR方法,可用于PRV野毒感染的定量檢測.
위광견병병독(PRV)야독유gE기인,이기역묘독주무gE기인,저위검측유무PRV야독감염제공삼고.용PCR방법확증PRV적gE기인편단,구건함유PRV gE기인편단적중조질립.이계렬희석후적중조질립작위모판,응용SYBR Green I래진행검측PRV gE기인적실시형광정량PCR확증.결과현시:재(6.9×107～6.9×101) copies/μL범위내,상린확증곡선지간간거균균,소유산물구유단일정제적용해곡선봉,표준곡선구유우량적선성관계.해방법최저가준학검측69 copies/μL적핵산모판,중복성시험적변이계수소우2％,대PRV-gE기인결실역묘독주화상견저원DNA병독적검측결과균위음성,대림상양품적검출솔고우상규PCR방법.연구결과표명,건립료1충특이성강、령민도고、중복성호적검측PRV gE기인적SYBR Green I형광정량PCR방법,가용우PRV야독감염적정량검측.
