北京农学院学报
北京農學院學報
북경농학원학보
Journal of Beijing University OF Agriculture
2015年
4期
24-28
,共5页
韩晶玉%楼怡宁%师光禄%陈青%彭博%卜春亚
韓晶玉%樓怡寧%師光祿%陳青%彭博%蔔春亞
한정옥%루이저%사광록%진청%팽박%복춘아
乙酰胆碱酯酶%朱砂叶螨%293T细胞%转染%体外表达
乙酰膽堿酯酶%硃砂葉螨%293T細胞%轉染%體外錶達
을선담감지매%주사협만%293T세포%전염%체외표체
Acetylcholinesterase%Tetranychus cinnabarinus%293T cell%transfection%in vitro expression
乙酰胆碱酯酶(AChE;EC3.1.1.7)是神经传导中调节神经递质乙酰胆碱水平的一种关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的主要作用靶标.目前关于朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的真核表达还未见报道.本研究拟构建朱砂叶螨AChE的真核表达载体,进行在293T细胞中表达条件摸索.将朱砂叶螨野生型ace完整读框和去掉3’疏水区的ace基因分别插入到真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,经PCR和双酶切鉴定及测序验证后,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/ace.采用GFP报告基因确定在293T细胞中表达条件摸索,结果表明293T细胞的最适转染时间为48 h和LipofectamineTM 2000转染试剂的最适加样量为20 μL.本试验成功构建了朱砂叶螨AChE的真核表达载体,确定了在293T细胞中的表达条件,为后续筛选新型选择性AChE抑制剂奠定了基础.
乙酰膽堿酯酶(AChE;EC3.1.1.7)是神經傳導中調節神經遞質乙酰膽堿水平的一種關鍵酶,是有機燐和氨基甲痠酯類農藥的主要作用靶標.目前關于硃砂葉螨乙酰膽堿酯酶的真覈錶達還未見報道.本研究擬構建硃砂葉螨AChE的真覈錶達載體,進行在293T細胞中錶達條件摸索.將硃砂葉螨野生型ace完整讀框和去掉3’疏水區的ace基因分彆插入到真覈錶達載體pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,經PCR和雙酶切鑒定及測序驗證後,成功構建瞭真覈錶達載體pcDNA3.1/ace.採用GFP報告基因確定在293T細胞中錶達條件摸索,結果錶明293T細胞的最適轉染時間為48 h和LipofectamineTM 2000轉染試劑的最適加樣量為20 μL.本試驗成功構建瞭硃砂葉螨AChE的真覈錶達載體,確定瞭在293T細胞中的錶達條件,為後續篩選新型選擇性AChE抑製劑奠定瞭基礎.
을선담감지매(AChE;EC3.1.1.7)시신경전도중조절신경체질을선담감수평적일충관건매,시유궤린화안기갑산지류농약적주요작용파표.목전관우주사협만을선담감지매적진핵표체환미견보도.본연구의구건주사협만AChE적진핵표체재체,진행재293T세포중표체조건모색.장주사협만야생형ace완정독광화거도3’소수구적ace기인분별삽입도진핵표체재체pcDNA3.1/V5-His-TOPO중,경PCR화쌍매절감정급측서험증후,성공구건료진핵표체재체pcDNA3.1/ace.채용GFP보고기인학정재293T세포중표체조건모색,결과표명293T세포적최괄전염시간위48 h화LipofectamineTM 2000전염시제적최괄가양량위20 μL.본시험성공구건료주사협만AChE적진핵표체재체,학정료재293T세포중적표체조건,위후속사선신형선택성AChE억제제전정료기출.
