西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica
2015年
9期
1767-1775
,共9页
异子蓬%C4盐生植物%磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶%非生物胁迫
異子蓬%C4鹽生植物%燐痠烯醇式丙酮痠羧化酶%非生物脅迫
이자봉%C4염생식물%린산희순식병동산최화매%비생물협박
Suaeda aralocaspica%C4 halophyte%phosphoenolpyruvate carboxylase%abiotic stresses
该研究在Escherichia coli Transetta(DE3)中表达了C4盐生植物异子蓬的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(PEPC),并进行了酶学特性及非生物胁迫响应分析,以期初步阐明PEPC基因在非生物胁迫下的生物学功能,为异子蓬PEPC的非生物胁迫的抗性生理研究提供参考依据.基于5'-RACE技术获得异子蓬PEPC全长基因(GenBank登录号为KP985714),构建了E.coli Transetta::pGEX-4T-1-PEPC重组菌株.通过分光光度法和酶联免疫吸附技术(ELISA)分别测定了PEPC重组蛋白的酶活和含量,并检测E.coli Transetta::pGEX-4T-1-PEPC重组菌株在非生物胁迫下的耐受性.生物信息学分析发现,该PEPC基因的cDNA全长为2 901 bp,编码966个氨基酸,与甜菜(Beta vulgaris)PEPC的氨基酸序列一致性达90％,具有PEPC的典型保守结构域(PEPcase)以及V1TAHPTQsiRR和VMIGYSDSgKDAG活性位点;PEPC蛋白属PEPC-1型的不含信号肽的非分泌型亲水蛋白.Western blot结果显示,融合GST的PEPC蛋白的分子量约130～ 140 kD;在37℃用0.8 mmol/L IPTG诱导E.coli Transetta::pGEX4T-1-PEPC重组菌株显示出更高的PEPC酶活及含量,而且E.coli Transetta::pGEX4T1PEPC重组菌在200～800 mmol/L NaCl、5％～20％聚乙二醇(PEG)6 000、25℃～52℃温度范围、50～400μmol/L甲基紫精和pH 3.0～11.0的非生物胁迫下生长均明显优于对照.研究表明,异子蓬PEPC基因的表达提高了E.coli耐受非生物胁迫的能力.
該研究在Escherichia coli Transetta(DE3)中錶達瞭C4鹽生植物異子蓬的燐痠烯醇式丙酮痠羧化酶基因(PEPC),併進行瞭酶學特性及非生物脅迫響應分析,以期初步闡明PEPC基因在非生物脅迫下的生物學功能,為異子蓬PEPC的非生物脅迫的抗性生理研究提供參攷依據.基于5'-RACE技術穫得異子蓬PEPC全長基因(GenBank登錄號為KP985714),構建瞭E.coli Transetta::pGEX-4T-1-PEPC重組菌株.通過分光光度法和酶聯免疫吸附技術(ELISA)分彆測定瞭PEPC重組蛋白的酶活和含量,併檢測E.coli Transetta::pGEX-4T-1-PEPC重組菌株在非生物脅迫下的耐受性.生物信息學分析髮現,該PEPC基因的cDNA全長為2 901 bp,編碼966箇氨基痠,與甜菜(Beta vulgaris)PEPC的氨基痠序列一緻性達90％,具有PEPC的典型保守結構域(PEPcase)以及V1TAHPTQsiRR和VMIGYSDSgKDAG活性位點;PEPC蛋白屬PEPC-1型的不含信號肽的非分泌型親水蛋白.Western blot結果顯示,融閤GST的PEPC蛋白的分子量約130～ 140 kD;在37℃用0.8 mmol/L IPTG誘導E.coli Transetta::pGEX4T-1-PEPC重組菌株顯示齣更高的PEPC酶活及含量,而且E.coli Transetta::pGEX4T1PEPC重組菌在200～800 mmol/L NaCl、5％～20％聚乙二醇(PEG)6 000、25℃～52℃溫度範圍、50～400μmol/L甲基紫精和pH 3.0～11.0的非生物脅迫下生長均明顯優于對照.研究錶明,異子蓬PEPC基因的錶達提高瞭E.coli耐受非生物脅迫的能力.
해연구재Escherichia coli Transetta(DE3)중표체료C4염생식물이자봉적린산희순식병동산최화매기인(PEPC),병진행료매학특성급비생물협박향응분석,이기초보천명PEPC기인재비생물협박하적생물학공능,위이자봉PEPC적비생물협박적항성생리연구제공삼고의거.기우5'-RACE기술획득이자봉PEPC전장기인(GenBank등록호위KP985714),구건료E.coli Transetta::pGEX-4T-1-PEPC중조균주.통과분광광도법화매련면역흡부기술(ELISA)분별측정료PEPC중조단백적매활화함량,병검측E.coli Transetta::pGEX-4T-1-PEPC중조균주재비생물협박하적내수성.생물신식학분석발현,해PEPC기인적cDNA전장위2 901 bp,편마966개안기산,여첨채(Beta vulgaris)PEPC적안기산서렬일치성체90％,구유PEPC적전형보수결구역(PEPcase)이급V1TAHPTQsiRR화VMIGYSDSgKDAG활성위점;PEPC단백속PEPC-1형적불함신호태적비분비형친수단백.Western blot결과현시,융합GST적PEPC단백적분자량약130～ 140 kD;재37℃용0.8 mmol/L IPTG유도E.coli Transetta::pGEX4T-1-PEPC중조균주현시출경고적PEPC매활급함량,이차E.coli Transetta::pGEX4T1PEPC중조균재200～800 mmol/L NaCl、5％～20％취을이순(PEG)6 000、25℃～52℃온도범위、50～400μmol/L갑기자정화pH 3.0～11.0적비생물협박하생장균명현우우대조.연구표명,이자봉PEPC기인적표체제고료E.coli내수비생물협박적능력.
