西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica
2015年
9期
1722-1727
,共6页
郑蕊%岳思君%王丽娟%钱贻崧%代金霞
鄭蕊%嶽思君%王麗娟%錢貽崧%代金霞
정예%악사군%왕려연%전이숭%대금하
枸杞%LbMYB103%植物过量表达载体%拟南芥%遗传转化
枸杞%LbMYB103%植物過量錶達載體%擬南芥%遺傳轉化
구기%LbMYB103%식물과량표체재체%의남개%유전전화
wolfberry(Lycium barbarum L.)%LbMYB103%plant over-expression vector%Arabidopsis thaliana%genetic transformation
以构杞品种‘宁杞1号’花药为材料,采用RT-PCR技术,分离了R2R3类MYB基因LbMYB103包含完整开放阅读框(ORF)的cDNA片段,碱基序列与已知基因HQ415755完全一致.运用Gateway技术构建LbMYB103基因植物过表达载体pMDC83-LbMYB103,利用基因枪法将融合有绿色荧光蛋白(GFP)的过表达载体转入洋葱表皮细胞,将LbMYB103基因定位在细胞核.实时荧光定量PCR分析发现,LbMYB103基因在花药中优势表达,果实中表达量较低,在根、茎和叶中均未检测到其转录本,推测LbMYB103基因可能在花药发育过程中起重要作用.通过根癌农杆菌介导法将pMDC83-LbMYB103转入拟南芥(Col-0),经筛选获得T1代抗性再生植株52棵,PCR鉴定有41棵阳性植株,收获T1代种子,经抗性筛选获得T2代抗性植株29棵,PCR鉴定有23棵阳性植株.实时荧光定量PCR分析表明,LbMYB103在拟南芥植株的基因组中正常表达.表型观察发现T1和T2代拟南芥花药发育异常,花发育迟缓,果荚短小无种子,进一步表明LbMYB1 03可能与植物的育性有关.该结果为进一步开展枸杞遗传转化,深入研究LbMYB103基因在枸杞花药发育过程中可能发挥的调控功能奠定了基础.
以構杞品種‘寧杞1號’花藥為材料,採用RT-PCR技術,分離瞭R2R3類MYB基因LbMYB103包含完整開放閱讀框(ORF)的cDNA片段,堿基序列與已知基因HQ415755完全一緻.運用Gateway技術構建LbMYB103基因植物過錶達載體pMDC83-LbMYB103,利用基因鎗法將融閤有綠色熒光蛋白(GFP)的過錶達載體轉入洋蔥錶皮細胞,將LbMYB103基因定位在細胞覈.實時熒光定量PCR分析髮現,LbMYB103基因在花藥中優勢錶達,果實中錶達量較低,在根、莖和葉中均未檢測到其轉錄本,推測LbMYB103基因可能在花藥髮育過程中起重要作用.通過根癌農桿菌介導法將pMDC83-LbMYB103轉入擬南芥(Col-0),經篩選穫得T1代抗性再生植株52棵,PCR鑒定有41棵暘性植株,收穫T1代種子,經抗性篩選穫得T2代抗性植株29棵,PCR鑒定有23棵暘性植株.實時熒光定量PCR分析錶明,LbMYB103在擬南芥植株的基因組中正常錶達.錶型觀察髮現T1和T2代擬南芥花藥髮育異常,花髮育遲緩,果莢短小無種子,進一步錶明LbMYB1 03可能與植物的育性有關.該結果為進一步開展枸杞遺傳轉化,深入研究LbMYB103基因在枸杞花藥髮育過程中可能髮揮的調控功能奠定瞭基礎.
이구기품충‘저기1호’화약위재료,채용RT-PCR기술,분리료R2R3류MYB기인LbMYB103포함완정개방열독광(ORF)적cDNA편단,감기서렬여이지기인HQ415755완전일치.운용Gateway기술구건LbMYB103기인식물과표체재체pMDC83-LbMYB103,이용기인창법장융합유록색형광단백(GFP)적과표체재체전입양총표피세포,장LbMYB103기인정위재세포핵.실시형광정량PCR분석발현,LbMYB103기인재화약중우세표체,과실중표체량교저,재근、경화협중균미검측도기전록본,추측LbMYB103기인가능재화약발육과정중기중요작용.통과근암농간균개도법장pMDC83-LbMYB103전입의남개(Col-0),경사선획득T1대항성재생식주52과,PCR감정유41과양성식주,수획T1대충자,경항성사선획득T2대항성식주29과,PCR감정유23과양성식주.실시형광정량PCR분석표명,LbMYB103재의남개식주적기인조중정상표체.표형관찰발현T1화T2대의남개화약발육이상,화발육지완,과협단소무충자,진일보표명LbMYB1 03가능여식물적육성유관.해결과위진일보개전구기유전전화,심입연구LbMYB103기인재구기화약발육과정중가능발휘적조공공능전정료기출.
