植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
Acta Phytopathologica Sinica
2015年
5期
476-485
,共10页
赵文%王静%李伟滔%王静%李晓兵%朱立煌%陈学伟
趙文%王靜%李偉滔%王靜%李曉兵%硃立煌%陳學偉
조문%왕정%리위도%왕정%리효병%주립황%진학위
抗稻瘟病%PID3%GST pull-down%互作蛋白%稻瘟病菌
抗稻瘟病%PID3%GST pull-down%互作蛋白%稻瘟病菌
항도온병%PID3%GST pull-down%호작단백%도온병균
rice blast resistance%PID3%GST pull-down%interacting protein%Magnaporthe oryzae
Pid3是从水稻中克隆获得的编码CC-NBS-LRR类蛋白的稻瘟病抗病基因.为了更深入地研究Pid3编码蛋白PID3介导的稻瘟病抗性的分子调节机制,我们应用GST pull-down结合质谱技术,对水稻抗稻瘟病蛋白PID3的互作蛋白进行了鉴定和分析.首先,成功构建了带有GST标签且能够表达PID3的CC-NBS结构域的融合蛋白表达载体pGEX6P1-PID3CC-NBs,经诱导表达和GST beads纯化后获得GST-PID3CC-NBS融合蛋白.我们以Pid3的转基因水稻纯合株系Pid3-TP309为研究材料,分别用对其致病和不致病的稻瘟病菌生理小种ZB13和ZHONG-10-8-14接种,然后取叶片分别提取获得两组总蛋白.用纯化后的蛋白GST-PID3CC-NBS分别与两组总蛋白共培养后,利用GST pull-down技术获得了分别在抗病、感病反应中能与PID3CC-NBS互作的两组候选蛋白.通过质谱技术鉴定这些蛋白的氨基酸序列,比对分析其在抗病、感病途径中与PID3结合的差异性,我们共筛选出31个只在PID3介导的抗稻瘟病反应中能与其特异结合的PID3互作蛋白,这些互作蛋白包括受体激酶、LRR类蛋白、ATP酶、磷酸羧化酶和离子通道蛋白等,广泛参与了调控细胞程序化死亡、胁迫防御反应、物质与能量代谢和信号传导等多个生物学过程.本研究探寻了PID3介导的抗病信号转导过程的关键因子,研究结果为揭示PID3介导的稻瘟病抗病分子机理奠定了良好基础.
Pid3是從水稻中剋隆穫得的編碼CC-NBS-LRR類蛋白的稻瘟病抗病基因.為瞭更深入地研究Pid3編碼蛋白PID3介導的稻瘟病抗性的分子調節機製,我們應用GST pull-down結閤質譜技術,對水稻抗稻瘟病蛋白PID3的互作蛋白進行瞭鑒定和分析.首先,成功構建瞭帶有GST標籤且能夠錶達PID3的CC-NBS結構域的融閤蛋白錶達載體pGEX6P1-PID3CC-NBs,經誘導錶達和GST beads純化後穫得GST-PID3CC-NBS融閤蛋白.我們以Pid3的轉基因水稻純閤株繫Pid3-TP309為研究材料,分彆用對其緻病和不緻病的稻瘟病菌生理小種ZB13和ZHONG-10-8-14接種,然後取葉片分彆提取穫得兩組總蛋白.用純化後的蛋白GST-PID3CC-NBS分彆與兩組總蛋白共培養後,利用GST pull-down技術穫得瞭分彆在抗病、感病反應中能與PID3CC-NBS互作的兩組候選蛋白.通過質譜技術鑒定這些蛋白的氨基痠序列,比對分析其在抗病、感病途徑中與PID3結閤的差異性,我們共篩選齣31箇隻在PID3介導的抗稻瘟病反應中能與其特異結閤的PID3互作蛋白,這些互作蛋白包括受體激酶、LRR類蛋白、ATP酶、燐痠羧化酶和離子通道蛋白等,廣汎參與瞭調控細胞程序化死亡、脅迫防禦反應、物質與能量代謝和信號傳導等多箇生物學過程.本研究探尋瞭PID3介導的抗病信號轉導過程的關鍵因子,研究結果為揭示PID3介導的稻瘟病抗病分子機理奠定瞭良好基礎.
Pid3시종수도중극륭획득적편마CC-NBS-LRR류단백적도온병항병기인.위료경심입지연구Pid3편마단백PID3개도적도온병항성적분자조절궤제,아문응용GST pull-down결합질보기술,대수도항도온병단백PID3적호작단백진행료감정화분석.수선,성공구건료대유GST표첨차능구표체PID3적CC-NBS결구역적융합단백표체재체pGEX6P1-PID3CC-NBs,경유도표체화GST beads순화후획득GST-PID3CC-NBS융합단백.아문이Pid3적전기인수도순합주계Pid3-TP309위연구재료,분별용대기치병화불치병적도온병균생리소충ZB13화ZHONG-10-8-14접충,연후취협편분별제취획득량조총단백.용순화후적단백GST-PID3CC-NBS분별여량조총단백공배양후,이용GST pull-down기술획득료분별재항병、감병반응중능여PID3CC-NBS호작적량조후선단백.통과질보기술감정저사단백적안기산서렬,비대분석기재항병、감병도경중여PID3결합적차이성,아문공사선출31개지재PID3개도적항도온병반응중능여기특이결합적PID3호작단백,저사호작단백포괄수체격매、LRR류단백、ATP매、린산최화매화리자통도단백등,엄범삼여료조공세포정서화사망、협박방어반응、물질여능량대사화신호전도등다개생물학과정.본연구탐심료PID3개도적항병신호전도과정적관건인자,연구결과위게시PID3개도적도온병항병분자궤리전정료량호기출.
