中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
Journal of Sun Yat-sen University(Medical Sciences)
2015年
5期
641-649
,共9页
彭高%黄卓琼%罗海华%刘超%张意军
彭高%黃卓瓊%囉海華%劉超%張意軍
팽고%황탁경%라해화%류초%장의군
miR-4279%核心启动子%Notch-1基因%凋亡%H9细胞系
miR-4279%覈心啟動子%Notch-1基因%凋亡%H9細胞繫
miR-4279%핵심계동자%Notch-1기인%조망%H9세포계
miR-4279%core promoter region%Notch-1%apoptosis%H9 cell line
[目的]寻找与Notch-1基因核心启动子结合的microRNA (miRNA)并阐明其调控功能,研究免疫细胞肿瘤的发生发展机制.[方法]首先使用生物信息学手段筛选与Notch-1基因核心启动子区域结合的miRNA,进而利用荧光素酶报告系统对其调控作用进行实验验证;通过突变核心启动子上的结合位点进一步确定该miRNA特异性靶向基因核心启动子区域.检测转染该miRNA后H9细胞中Notch-1的mRNA与内源蛋白表达水平.另外通过转染该miRNA并用H2O2诱导凋亡,研究该miRNA对H9细胞凋亡的影响.进一步在上述实验条件下,使用siRNA降低靶基因(Notc h-1)的表达,然后检测miRNA对H9细胞系的凋亡的影响.[结果]首先通过软件预测,我们发现了miR-4279可以与Notch-1的核心启动子序列结合.荧光素酶报告实验表明miR-4279可以增强Notch-1启动子的转录活性;而在miR-4279的靶位点引入突变后,该增强作用消失.RT-qPCR和Western Blot实验表明miR-4279能够显著增强内源Notch-1 mRNA与蛋白的表达.H2O2诱导凋亡实验表明,miR-4279可以抑制H9细胞的凋亡.siRNA干扰实验表明,当Notch-1通路被抑制后,miR-4279导致的细胞凋亡抑制的效果消失.[结论]miR-4279通过靶向Notch-1基因核心启动子区域,特异性增加Notch-1基因的表达,进而增强H9细胞对H202诱导的凋亡的抗性.
[目的]尋找與Notch-1基因覈心啟動子結閤的microRNA (miRNA)併闡明其調控功能,研究免疫細胞腫瘤的髮生髮展機製.[方法]首先使用生物信息學手段篩選與Notch-1基因覈心啟動子區域結閤的miRNA,進而利用熒光素酶報告繫統對其調控作用進行實驗驗證;通過突變覈心啟動子上的結閤位點進一步確定該miRNA特異性靶嚮基因覈心啟動子區域.檢測轉染該miRNA後H9細胞中Notch-1的mRNA與內源蛋白錶達水平.另外通過轉染該miRNA併用H2O2誘導凋亡,研究該miRNA對H9細胞凋亡的影響.進一步在上述實驗條件下,使用siRNA降低靶基因(Notc h-1)的錶達,然後檢測miRNA對H9細胞繫的凋亡的影響.[結果]首先通過軟件預測,我們髮現瞭miR-4279可以與Notch-1的覈心啟動子序列結閤.熒光素酶報告實驗錶明miR-4279可以增彊Notch-1啟動子的轉錄活性;而在miR-4279的靶位點引入突變後,該增彊作用消失.RT-qPCR和Western Blot實驗錶明miR-4279能夠顯著增彊內源Notch-1 mRNA與蛋白的錶達.H2O2誘導凋亡實驗錶明,miR-4279可以抑製H9細胞的凋亡.siRNA榦擾實驗錶明,噹Notch-1通路被抑製後,miR-4279導緻的細胞凋亡抑製的效果消失.[結論]miR-4279通過靶嚮Notch-1基因覈心啟動子區域,特異性增加Notch-1基因的錶達,進而增彊H9細胞對H202誘導的凋亡的抗性.
[목적]심조여Notch-1기인핵심계동자결합적microRNA (miRNA)병천명기조공공능,연구면역세포종류적발생발전궤제.[방법]수선사용생물신식학수단사선여Notch-1기인핵심계동자구역결합적miRNA,진이이용형광소매보고계통대기조공작용진행실험험증;통과돌변핵심계동자상적결합위점진일보학정해miRNA특이성파향기인핵심계동자구역.검측전염해miRNA후H9세포중Notch-1적mRNA여내원단백표체수평.령외통과전염해miRNA병용H2O2유도조망,연구해miRNA대H9세포조망적영향.진일보재상술실험조건하,사용siRNA강저파기인(Notc h-1)적표체,연후검측miRNA대H9세포계적조망적영향.[결과]수선통과연건예측,아문발현료miR-4279가이여Notch-1적핵심계동자서렬결합.형광소매보고실험표명miR-4279가이증강Notch-1계동자적전록활성;이재miR-4279적파위점인입돌변후,해증강작용소실.RT-qPCR화Western Blot실험표명miR-4279능구현저증강내원Notch-1 mRNA여단백적표체.H2O2유도조망실험표명,miR-4279가이억제H9세포적조망.siRNA간우실험표명,당Notch-1통로피억제후,miR-4279도치적세포조망억제적효과소실.[결론]miR-4279통과파향Notch-1기인핵심계동자구역,특이성증가Notch-1기인적표체,진이증강H9세포대H202유도적조망적항성.
