内科
內科
내과
Internal Medicine of China
2015年
5期
604-606,676
,共4页
陈雅静%许淑茹%付达华%许秀宽%舒伟
陳雅靜%許淑茹%付達華%許秀寬%舒偉
진아정%허숙여%부체화%허수관%서위
人Tie2基因%载体构建%转染
人Tie2基因%載體構建%轉染
인Tie2기인%재체구건%전염
目的 构建人Tie2基因真核表达载体,并建立稳定过表达Tie2基因的SKOV3细胞系.方法 采用RT-PCR方法从人肝癌细胞BEL-7402细胞系中扩增Tie2基因编码区(cDNA),将产物克隆至pEGFP-N1真核表达载体,构建重组质粒pEGFP-N1-Tie2并测序鉴定.用构建成功的pEGFP-N1-Tie2真核表达载体转染人卵巢癌细胞SKOV3,经G418稳定筛选,分离单克隆,最后获得Tie2稳定表达的SKOV3细胞系,并用实时荧光定量PCR、Western Blot方法鉴定构建结果.结果 成功构建pEGFP-N1-Tie2真核表达载体,获得了稳定过表达人Tie2基因的SKOV3细胞株.结论 在SKOV3细胞系中稳定过表达人源Tie2基因,为下一步研究Tie2基因的功能和应用奠定了基础.
目的 構建人Tie2基因真覈錶達載體,併建立穩定過錶達Tie2基因的SKOV3細胞繫.方法 採用RT-PCR方法從人肝癌細胞BEL-7402細胞繫中擴增Tie2基因編碼區(cDNA),將產物剋隆至pEGFP-N1真覈錶達載體,構建重組質粒pEGFP-N1-Tie2併測序鑒定.用構建成功的pEGFP-N1-Tie2真覈錶達載體轉染人卵巢癌細胞SKOV3,經G418穩定篩選,分離單剋隆,最後穫得Tie2穩定錶達的SKOV3細胞繫,併用實時熒光定量PCR、Western Blot方法鑒定構建結果.結果 成功構建pEGFP-N1-Tie2真覈錶達載體,穫得瞭穩定過錶達人Tie2基因的SKOV3細胞株.結論 在SKOV3細胞繫中穩定過錶達人源Tie2基因,為下一步研究Tie2基因的功能和應用奠定瞭基礎.
목적 구건인Tie2기인진핵표체재체,병건립은정과표체Tie2기인적SKOV3세포계.방법 채용RT-PCR방법종인간암세포BEL-7402세포계중확증Tie2기인편마구(cDNA),장산물극륭지pEGFP-N1진핵표체재체,구건중조질립pEGFP-N1-Tie2병측서감정.용구건성공적pEGFP-N1-Tie2진핵표체재체전염인란소암세포SKOV3,경G418은정사선,분리단극륭,최후획득Tie2은정표체적SKOV3세포계,병용실시형광정량PCR、Western Blot방법감정구건결과.결과 성공구건pEGFP-N1-Tie2진핵표체재체,획득료은정과표체인Tie2기인적SKOV3세포주.결론 재SKOV3세포계중은정과표체인원Tie2기인,위하일보연구Tie2기인적공능화응용전정료기출.
