中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine
2015年
10期
756-760
,共5页
黄慧%田亚凯%孙亚伟%陈丽鹏%苑丽%刘建华%崔耀明%胡功政
黃慧%田亞凱%孫亞偉%陳麗鵬%苑麗%劉建華%崔耀明%鬍功政
황혜%전아개%손아위%진려붕%원려%류건화%최요명%호공정
鼠伤寒沙门菌%应答调节蛋白基因cpxR%基因敲除%最小抑菌浓度
鼠傷寒沙門菌%應答調節蛋白基因cpxR%基因敲除%最小抑菌濃度
서상한사문균%응답조절단백기인cpxR%기인고제%최소억균농도
Salmonella typhimurium%cpxR gene%knock out%minimal inhibitory concertration
为研究鼠伤寒沙门菌双组分信号系统的应答调节蛋白基因cpxR对菌株药物敏感性的影响,本研究以pKD4质粒为模板,利用PCR扩增两侧与cpxR基因上下游同源且含有卡那霉素抗性(kanf)基因的线性打靶DNA片段,在pKD46质粒的辅助下进行Red同源重组,利用线性打靶DNA片段替换鼠伤寒沙门菌CVCC 541(JS)株的cpxR基因,再利用pCP20质粒消除FRT位点间的kanr基因,构建基因缺失株JS△cpxR.并将重组表达质粒pBAD-cpxR转化于JS△cpxR中,制备回补菌株JS△cpxR/pcpxR.利用微量稀释法测定12种代表性抗菌药物对亲本株JS、JS△cpxR和回补菌株JS△cpxR/pcpxR的最小抑菌浓度(MIC).结果显示,庆大霉素(GEN)、阿米卡星(AMK)、头孢噻呋(CEF)和头孢曲松(CRO)对亲本株JS的MIC值分别为JS△cpxR的4、4、4和2倍;而随诱导剂L-阿拉伯糖浓度的增高,这4种药物对回补菌株JS△cpxR/pcpxR的MIC值均逐渐恢复到亲本株JS的水平,呈剂量依赖性关系,而且高浓度诱导时4种药物对回补菌株的MIC分别为JS△cpxR的16、8、8和16倍,其他药物的MIC值未出现明显的变化.本研究结果表明:cpxR能够调控鼠伤寒沙门菌对GEN、AMK、CEF和CRO的敏感性.
為研究鼠傷寒沙門菌雙組分信號繫統的應答調節蛋白基因cpxR對菌株藥物敏感性的影響,本研究以pKD4質粒為模闆,利用PCR擴增兩側與cpxR基因上下遊同源且含有卡那黴素抗性(kanf)基因的線性打靶DNA片段,在pKD46質粒的輔助下進行Red同源重組,利用線性打靶DNA片段替換鼠傷寒沙門菌CVCC 541(JS)株的cpxR基因,再利用pCP20質粒消除FRT位點間的kanr基因,構建基因缺失株JS△cpxR.併將重組錶達質粒pBAD-cpxR轉化于JS△cpxR中,製備迴補菌株JS△cpxR/pcpxR.利用微量稀釋法測定12種代錶性抗菌藥物對親本株JS、JS△cpxR和迴補菌株JS△cpxR/pcpxR的最小抑菌濃度(MIC).結果顯示,慶大黴素(GEN)、阿米卡星(AMK)、頭孢噻呋(CEF)和頭孢麯鬆(CRO)對親本株JS的MIC值分彆為JS△cpxR的4、4、4和2倍;而隨誘導劑L-阿拉伯糖濃度的增高,這4種藥物對迴補菌株JS△cpxR/pcpxR的MIC值均逐漸恢複到親本株JS的水平,呈劑量依賴性關繫,而且高濃度誘導時4種藥物對迴補菌株的MIC分彆為JS△cpxR的16、8、8和16倍,其他藥物的MIC值未齣現明顯的變化.本研究結果錶明:cpxR能夠調控鼠傷寒沙門菌對GEN、AMK、CEF和CRO的敏感性.
위연구서상한사문균쌍조분신호계통적응답조절단백기인cpxR대균주약물민감성적영향,본연구이pKD4질립위모판,이용PCR확증량측여cpxR기인상하유동원차함유잡나매소항성(kanf)기인적선성타파DNA편단,재pKD46질립적보조하진행Red동원중조,이용선성타파DNA편단체환서상한사문균CVCC 541(JS)주적cpxR기인,재이용pCP20질립소제FRT위점간적kanr기인,구건기인결실주JS△cpxR.병장중조표체질립pBAD-cpxR전화우JS△cpxR중,제비회보균주JS△cpxR/pcpxR.이용미량희석법측정12충대표성항균약물대친본주JS、JS△cpxR화회보균주JS△cpxR/pcpxR적최소억균농도(MIC).결과현시,경대매소(GEN)、아미잡성(AMK)、두포새부(CEF)화두포곡송(CRO)대친본주JS적MIC치분별위JS△cpxR적4、4、4화2배;이수유도제L-아랍백당농도적증고,저4충약물대회보균주JS△cpxR/pcpxR적MIC치균축점회복도친본주JS적수평,정제량의뢰성관계,이차고농도유도시4충약물대회보균주적MIC분별위JS△cpxR적16、8、8화16배,기타약물적MIC치미출현명현적변화.본연구결과표명:cpxR능구조공서상한사문균대GEN、AMK、CEF화CRO적민감성.