生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
Letters in Biotechnology
2015年
5期
658-660
,共3页
汪明群%丛建波%程莉%董国福%王少霞%郑文%王长振%吴可
汪明群%叢建波%程莉%董國福%王少霞%鄭文%王長振%吳可
왕명군%총건파%정리%동국복%왕소하%정문%왕장진%오가
LSECtin-CRD-GST融合蛋白%原核表达%复性
LSECtin-CRD-GST融閤蛋白%原覈錶達%複性
LSECtin-CRD-GST융합단백%원핵표체%복성
LSECtin-CRD fusion protein%prokaryotic expression%refolding
目的:构建C型凝集素LSECtin主要功能结构域CRD的原核表达载体,在大肠杆菌中表达LSECtin-CRD-GST融合蛋白.方法:根据GenBank发布的LSECtin基因序列设计引物,利用基因重组技术将获得的LSECtin-CRDcDNA定向克隆至C端带GST蛋白标签序列的融合表达载体pGEX-6p-1中,转化大肠杆菌Origami (DE3)进行重组蛋白的诱导表达,用GST柱亲和纯化融合蛋白.结果:获得了原核表达载体pGEX-6p-1-LSECtin-CRD,诱导表达出大量相对分子质量约40×103的包涵体融合蛋白,经纯化、复性获得可溶蛋白,经Western印迹鉴定为目的蛋白.结论:获得足量的LSECtin-CRD-GST融合蛋白,为进一步研究CRD蛋白结构域的动态构象变化提供了实验材料.
目的:構建C型凝集素LSECtin主要功能結構域CRD的原覈錶達載體,在大腸桿菌中錶達LSECtin-CRD-GST融閤蛋白.方法:根據GenBank髮佈的LSECtin基因序列設計引物,利用基因重組技術將穫得的LSECtin-CRDcDNA定嚮剋隆至C耑帶GST蛋白標籤序列的融閤錶達載體pGEX-6p-1中,轉化大腸桿菌Origami (DE3)進行重組蛋白的誘導錶達,用GST柱親和純化融閤蛋白.結果:穫得瞭原覈錶達載體pGEX-6p-1-LSECtin-CRD,誘導錶達齣大量相對分子質量約40×103的包涵體融閤蛋白,經純化、複性穫得可溶蛋白,經Western印跡鑒定為目的蛋白.結論:穫得足量的LSECtin-CRD-GST融閤蛋白,為進一步研究CRD蛋白結構域的動態構象變化提供瞭實驗材料.
목적:구건C형응집소LSECtin주요공능결구역CRD적원핵표체재체,재대장간균중표체LSECtin-CRD-GST융합단백.방법:근거GenBank발포적LSECtin기인서렬설계인물,이용기인중조기술장획득적LSECtin-CRDcDNA정향극륭지C단대GST단백표첨서렬적융합표체재체pGEX-6p-1중,전화대장간균Origami (DE3)진행중조단백적유도표체,용GST주친화순화융합단백.결과:획득료원핵표체재체pGEX-6p-1-LSECtin-CRD,유도표체출대량상대분자질량약40×103적포함체융합단백,경순화、복성획득가용단백,경Western인적감정위목적단백.결론:획득족량적LSECtin-CRD-GST융합단백,위진일보연구CRD단백결구역적동태구상변화제공료실험재료.
