生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
Letters in Biotechnology
2015年
5期
605-610
,共6页
房婷%张晓鹏%章晟%戴萌萌%杨秀旭%付玲%于长明
房婷%張曉鵬%章晟%戴萌萌%楊秀旭%付玲%于長明
방정%장효붕%장성%대맹맹%양수욱%부령%우장명
重组人血小板衍生生长因子BB亚型%巴斯德毕赤酵母表达系统%表达与纯化
重組人血小闆衍生生長因子BB亞型%巴斯德畢赤酵母錶達繫統%錶達與純化
중조인혈소판연생생장인자BB아형%파사덕필적효모표체계통%표체여순화
recombinant human platelet-derived growth factor-BB%Pichia pastoris system%expression and purification
目的:用毕赤酵母表达系统表达重组人血小板衍生生长因子BB亚型(PDGF-BB).方法:采用PT-PCR从人早幼粒白血病细胞系HL-60细胞中获得目的基因,克隆到表达载体pMEX9K中,质粒线性化后转化酵母表达菌株GS115,筛选后的酵母表达菌株经BMGY/BMMY培养基体系诱导表达后,通过疏水作用、离子交换、凝胶过滤纯化获得目的蛋白,采用SDS-PAGE、Western印迹、N端氨基酸序列和MTT增殖活性测定等方法检测目的蛋白性质及生物活性.结果:重组人PDGF-BB为分泌表达,表达量大于100 mg/L;经三步纯化,获得纯度高于95％且具有较高活性(5.0×105 IU/mg)的目标蛋白.结论:利用毕赤酵母表达系统表达重组人PDGF-BB,表达产量高,成本低,工艺简单,易于工业化放大,有良好的市场前景.
目的:用畢赤酵母錶達繫統錶達重組人血小闆衍生生長因子BB亞型(PDGF-BB).方法:採用PT-PCR從人早幼粒白血病細胞繫HL-60細胞中穫得目的基因,剋隆到錶達載體pMEX9K中,質粒線性化後轉化酵母錶達菌株GS115,篩選後的酵母錶達菌株經BMGY/BMMY培養基體繫誘導錶達後,通過疏水作用、離子交換、凝膠過濾純化穫得目的蛋白,採用SDS-PAGE、Western印跡、N耑氨基痠序列和MTT增殖活性測定等方法檢測目的蛋白性質及生物活性.結果:重組人PDGF-BB為分泌錶達,錶達量大于100 mg/L;經三步純化,穫得純度高于95％且具有較高活性(5.0×105 IU/mg)的目標蛋白.結論:利用畢赤酵母錶達繫統錶達重組人PDGF-BB,錶達產量高,成本低,工藝簡單,易于工業化放大,有良好的市場前景.
목적:용필적효모표체계통표체중조인혈소판연생생장인자BB아형(PDGF-BB).방법:채용PT-PCR종인조유립백혈병세포계HL-60세포중획득목적기인,극륭도표체재체pMEX9K중,질립선성화후전화효모표체균주GS115,사선후적효모표체균주경BMGY/BMMY배양기체계유도표체후,통과소수작용、리자교환、응효과려순화획득목적단백,채용SDS-PAGE、Western인적、N단안기산서렬화MTT증식활성측정등방법검측목적단백성질급생물활성.결과:중조인PDGF-BB위분비표체,표체량대우100 mg/L;경삼보순화,획득순도고우95％차구유교고활성(5.0×105 IU/mg)적목표단백.결론:이용필적효모표체계통표체중조인PDGF-BB,표체산량고,성본저,공예간단,역우공업화방대,유량호적시장전경.
