CAJ | 학술논문

目的:克隆人H-Ras部分片段基因,获得其原核表达产物,并对融合蛋白进行纯化.方法:采用PCR技术从质粒Myc-H-Ras中扩增H-Ras(1-165)和H-Ras(165-189)结构域片段,将其克隆到pGEX-KG载体中,在大肠杆菌Rossate中表达后,利用GST-Sepharose 4B亲和珠对原核表达产物进行纯化,以SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达与纯化产物.结果:从Myc-H-Ras质粒中分别扩增获得约500和100 bp的DNA片段,并克隆至pGEX-KG载体,经测序与目的序列完全一致;在大肠杆菌Rossate中诱导表达出相对分子质量分别为46×103和29×103的目的蛋白,经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白GST-H-Ras(1-165)和GST-H-Ras(165-189).结论:获得了重组蛋白GST-H-Ras(1-165)、GST-H-Ras(165-189),为后续深入研究H-Ras影响肿瘤细胞生长的机制奠定了实验基础.
목적:극륭인H-Ras부분편단기인,획득기원핵표체산물,병대융합단백진행순화.방법:채용PCR기술종질립Myc-H-Ras중확증H-Ras(1-165)화H-Ras(165-189)결구역편단,장기극륭도pGEX-KG재체중,재대장간균Rossate중표체후,이용GST-Sepharose 4B친화주대원핵표체산물진행순화,이SDS-PAGE화Western인적감정표체여순화산물.결과:종Myc-H-Ras질립중분별확증획득약500화100 bp적DNA편단,병극륭지pGEX-KG재체,경측서여목적서렬완전일치;재대장간균Rossate중유도표체출상대분자질량분별위46×103화29×103적목적단백,경순화후획득료순도교고적중조단백GST-H-Ras(1-165)화GST-H-Ras(165-189).결론:획득료중조단백GST-H-Ras(1-165)、GST-H-Ras(165-189),위후속심입연구H-Ras영향종류세포생장적궤제전정료실험기출.