人自噬相关基因5真核表达载体的构建及表达鉴定
인자서상관기인5진핵표체재체적구건급표체감정
Construction and Expression Identification of Flag-Tagged Human ATG5 Eukaryotic Expression Vector
  • 万方数据
    生物技术通讯 생물기술통신
    Letters in Biotechnology
    2015年 5期 645-647 ,共3页

    纪贝贝%赵晖%徐小洁%梁迎春%黄蓉%范忠义%李玲%郭靖%洪甜

    기패패%조휘%서소길%량영춘%황용%범충의%리령%곽정%홍첨

    人自噬相关基因5%克隆%真核表达%自噬 人自噬相關基因5%剋隆%真覈錶達%自噬
    인자서상관기인5%극륭%진핵표체%자서
    human autophagy related gene 5%cloning%eukaryotic expression%autophagy
    目的:构建带Flag标签的自噬相关基因5(ATG5)的真核表达载体,获得Flag-ATG5融合蛋白.方法:以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增人ATG5编码序列,将其插入pcDNA3-Flag载体,转染人胚肾293T细胞后,Western印迹检测其表达情况;将该重组质粒与ATG12表达质粒共转染293T细胞,通过免疫共沉淀法检测2个蛋白的相互作用.结果:Flag-ATG5真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后融合蛋白获得表达,其相对分子质量约33× 103;Flag-ATG5可与Myc-ATG 12结合.结论:构建了带Flag标签的入ATG5真核表达载体,为进一步研究ATG5在自噬中的功能奠定了基础.
    목적:구건대Flag표첨적자서상관기인5(ATG5)적진핵표체재체,획득Flag-ATG5융합단백.방법:이인유선문고위모판,채용PCR기술확증인ATG5편마서렬,장기삽입pcDNA3-Flag재체,전염인배신293T세포후,Western인적검측기표체정황;장해중조질립여ATG12표체질립공전염293T세포,통과면역공침정법검측2개단백적상호작용.결과:Flag-ATG5진핵표체질립구건성공,전염293T세포후융합단백획득표체,기상대분자질량약33× 103;Flag-ATG5가여Myc-ATG 12결합.결론:구건료대Flag표첨적입ATG5진핵표체재체,위진일보연구ATG5재자서중적공능전정료기출.
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