临床超声医学杂志
臨床超聲醫學雜誌
림상초성의학잡지
Journal of Clinical Ultrasound in Medicine
2015年
9期
577-581
,共5页
张蔚%白文坤%寿文德%候瑞%胡兵
張蔚%白文坤%壽文德%候瑞%鬍兵
장위%백문곤%수문덕%후서%호병
正交设计%低频超声%微泡%血管内皮生长因子%前列腺癌%小鼠
正交設計%低頻超聲%微泡%血管內皮生長因子%前列腺癌%小鼠
정교설계%저빈초성%미포%혈관내피생장인자%전렬선암%소서
Orthogonal design%Low frequency ultrasound%Microbubbles%Vascular endothelial growth factor%Prostate cancer%Murine
目的 采用正交实验设计法,探究低频超声联合微泡抑制小鼠前列腺癌细胞(RM-1)血管内皮生长因子(VEGF)表达的最优参数组合.方法 选定超声功率、超声频率、辐照时间、微泡/细胞悬液体积比为正交优化的4个因素,每个因素设定4个水平,分别为超声频率:20 kHz、80 kHz、500 kHz及800 kHz;超声功率:100 mW/cm2、180 mW/cm2、270 mW/cm2及360 mW/cm2;辐照时间:30 s、60s、90 s及120 s;微泡/细胞悬液体积比:10％、20％、30％、40％,按照四因素四水平设计正交实验表,得到16个实验组,各组按相应条件采用连续波辐照后细胞继续培养24h,定量RT-PCR检测各组VEGFmRNA表达量从而获取最优组合条件.将小鼠RM-1细胞均分4组:对照组不进行任何处理;单独超声组采用正交实验设计法所得最优组合条件辐照细胞,但不加入微泡;单独微泡组仅加入最优百分体积的微泡;低频超声联合微泡组采用正交实验设计法所得最优组合条件辐照并加入最优百分体积微泡.各组处理后,即刻台盼蓝染色观察细胞的损伤情况;培养24h后,采用Western blot印迹法检测小鼠RM-1细胞中VEGF表达量.结果 抑制小鼠RM-1细胞VEGFmRNA表达的影响因素由大到小依次为:超声频率、超声功率、微泡/细胞悬液体积比、辐照时间;各因素不同水平的影响程度由大到小依次为:①超声频率:800 kHz、500 kHz、80 kHz、20 kHz;②超声功率:360 mW/cm2、180 mW/cm2、270 mW/cm2、100 mW/cm2;③辐照时间:30 s、90s、120 s、60 s;④微泡/细胞悬液体积比:20％、10％、40％、30％.正交实验设计法所得最优组合条件为:超声频率800 kHz、超声功率360 mW/cm2、超声辐照时间30 s及微泡/细胞悬液体积比20％.低频超声联合微泡组损伤细胞多于其他各组,单独超声组可见少量损伤细胞,对照组和单独微泡组损伤细胞极少.低频超声联合微泡组VEGF表达量少于其他各组,单独超声组表达量也少于对照组和单独微泡组,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).结论 低频超声联合微泡造影剂抑制小鼠RM-1细胞VEGF mRNA表达的最优组合条件为:超声频率800 kHz,超声功率360 mW/cm2,超声辐照时间30 s,微泡/细胞悬液体积比20％.在此实验条件下可以显著抑制VEGF的最终表达量.
目的 採用正交實驗設計法,探究低頻超聲聯閤微泡抑製小鼠前列腺癌細胞(RM-1)血管內皮生長因子(VEGF)錶達的最優參數組閤.方法 選定超聲功率、超聲頻率、輻照時間、微泡/細胞懸液體積比為正交優化的4箇因素,每箇因素設定4箇水平,分彆為超聲頻率:20 kHz、80 kHz、500 kHz及800 kHz;超聲功率:100 mW/cm2、180 mW/cm2、270 mW/cm2及360 mW/cm2;輻照時間:30 s、60s、90 s及120 s;微泡/細胞懸液體積比:10％、20％、30％、40％,按照四因素四水平設計正交實驗錶,得到16箇實驗組,各組按相應條件採用連續波輻照後細胞繼續培養24h,定量RT-PCR檢測各組VEGFmRNA錶達量從而穫取最優組閤條件.將小鼠RM-1細胞均分4組:對照組不進行任何處理;單獨超聲組採用正交實驗設計法所得最優組閤條件輻照細胞,但不加入微泡;單獨微泡組僅加入最優百分體積的微泡;低頻超聲聯閤微泡組採用正交實驗設計法所得最優組閤條件輻照併加入最優百分體積微泡.各組處理後,即刻檯盼藍染色觀察細胞的損傷情況;培養24h後,採用Western blot印跡法檢測小鼠RM-1細胞中VEGF錶達量.結果 抑製小鼠RM-1細胞VEGFmRNA錶達的影響因素由大到小依次為:超聲頻率、超聲功率、微泡/細胞懸液體積比、輻照時間;各因素不同水平的影響程度由大到小依次為:①超聲頻率:800 kHz、500 kHz、80 kHz、20 kHz;②超聲功率:360 mW/cm2、180 mW/cm2、270 mW/cm2、100 mW/cm2;③輻照時間:30 s、90s、120 s、60 s;④微泡/細胞懸液體積比:20％、10％、40％、30％.正交實驗設計法所得最優組閤條件為:超聲頻率800 kHz、超聲功率360 mW/cm2、超聲輻照時間30 s及微泡/細胞懸液體積比20％.低頻超聲聯閤微泡組損傷細胞多于其他各組,單獨超聲組可見少量損傷細胞,對照組和單獨微泡組損傷細胞極少.低頻超聲聯閤微泡組VEGF錶達量少于其他各組,單獨超聲組錶達量也少于對照組和單獨微泡組,差異均有統計學意義(均P＜ 0.05).結論 低頻超聲聯閤微泡造影劑抑製小鼠RM-1細胞VEGF mRNA錶達的最優組閤條件為:超聲頻率800 kHz,超聲功率360 mW/cm2,超聲輻照時間30 s,微泡/細胞懸液體積比20％.在此實驗條件下可以顯著抑製VEGF的最終錶達量.
목적 채용정교실험설계법,탐구저빈초성연합미포억제소서전렬선암세포(RM-1)혈관내피생장인자(VEGF)표체적최우삼수조합.방법 선정초성공솔、초성빈솔、복조시간、미포/세포현액체적비위정교우화적4개인소,매개인소설정4개수평,분별위초성빈솔:20 kHz、80 kHz、500 kHz급800 kHz;초성공솔:100 mW/cm2、180 mW/cm2、270 mW/cm2급360 mW/cm2;복조시간:30 s、60s、90 s급120 s;미포/세포현액체적비:10％、20％、30％、40％,안조사인소사수평설계정교실험표,득도16개실험조,각조안상응조건채용련속파복조후세포계속배양24h,정량RT-PCR검측각조VEGFmRNA표체량종이획취최우조합조건.장소서RM-1세포균분4조:대조조불진행임하처리;단독초성조채용정교실험설계법소득최우조합조건복조세포,단불가입미포;단독미포조부가입최우백분체적적미포;저빈초성연합미포조채용정교실험설계법소득최우조합조건복조병가입최우백분체적미포.각조처리후,즉각태반람염색관찰세포적손상정황;배양24h후,채용Western blot인적법검측소서RM-1세포중VEGF표체량.결과 억제소서RM-1세포VEGFmRNA표체적영향인소유대도소의차위:초성빈솔、초성공솔、미포/세포현액체적비、복조시간;각인소불동수평적영향정도유대도소의차위:①초성빈솔:800 kHz、500 kHz、80 kHz、20 kHz;②초성공솔:360 mW/cm2、180 mW/cm2、270 mW/cm2、100 mW/cm2;③복조시간:30 s、90s、120 s、60 s;④미포/세포현액체적비:20％、10％、40％、30％.정교실험설계법소득최우조합조건위:초성빈솔800 kHz、초성공솔360 mW/cm2、초성복조시간30 s급미포/세포현액체적비20％.저빈초성연합미포조손상세포다우기타각조,단독초성조가견소량손상세포,대조조화단독미포조손상세포겁소.저빈초성연합미포조VEGF표체량소우기타각조,단독초성조표체량야소우대조조화단독미포조,차이균유통계학의의(균P＜ 0.05).결론 저빈초성연합미포조영제억제소서RM-1세포VEGF mRNA표체적최우조합조건위:초성빈솔800 kHz,초성공솔360 mW/cm2,초성복조시간30 s,미포/세포현액체적비20％.재차실험조건하가이현저억제VEGF적최종표체량.
