热带作物学报
熱帶作物學報
열대작물학보
Chinese Journal of Tropical Crops
2015年
10期
1866-1872
,共7页
杨勇%庹德财%沈文涛%言普%黎小瑛%周鹏%王锐萍
楊勇%庹德財%瀋文濤%言普%黎小瑛%週鵬%王銳萍
양용%탁덕재%침문도%언보%려소영%주붕%왕예평
番木瓜病毒%外壳蛋白%抗血清%ID-ELISA
番木瓜病毒%外殼蛋白%抗血清%ID-ELISA
번목과병독%외각단백%항혈청%ID-ELISA
Papaya viru%Coat protein%Antibody%ID-ELISA
利用PCR方法分别扩增番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)、番木瓜畸形花叶病毒(papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)和番木瓜花叶病(papaya mosaic virus,PaMV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并连接到原核表达载体pET-28a上,获得重组质粒pET28-PRSV-CP、pET28-PLDMV-CP和pET28-PaMV-CP,通过转化、诱导表达后,经SDS-PAGE分析显示,这3种CP蛋白在大肠杆菌中高效表达,其中PRSV CP蛋白和PLDMV CP以包涵体形式存在,PaMV CP以可溶蛋白形式存在.利用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化获得了3种病毒的重组CP蛋白,并免疫大白兔获得高效价的抗体.Western blot检测结果表明,这3种抗血清与对应的诱导表达蛋白发生特异反应.再采用抗血清建立一种快捷、简便和低成本的ID-ELISA (Indirect enzyme-linked immunosorbent assay)技术,并利用此技术对海南岛283个疑似感病的番木瓜样品进行检测鉴别,初步掌握了海南岛3种主要番木瓜病毒的分布及感病情况,为下一步该病的有效防治策略提供科学依据.
利用PCR方法分彆擴增番木瓜環斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)、番木瓜畸形花葉病毒(papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)和番木瓜花葉病(papaya mosaic virus,PaMV)的外殼蛋白(coat protein,CP)基因,併連接到原覈錶達載體pET-28a上,穫得重組質粒pET28-PRSV-CP、pET28-PLDMV-CP和pET28-PaMV-CP,通過轉化、誘導錶達後,經SDS-PAGE分析顯示,這3種CP蛋白在大腸桿菌中高效錶達,其中PRSV CP蛋白和PLDMV CP以包涵體形式存在,PaMV CP以可溶蛋白形式存在.利用Ni2+-NTA瓊脂糖親和層析純化穫得瞭3種病毒的重組CP蛋白,併免疫大白兔穫得高效價的抗體.Western blot檢測結果錶明,這3種抗血清與對應的誘導錶達蛋白髮生特異反應.再採用抗血清建立一種快捷、簡便和低成本的ID-ELISA (Indirect enzyme-linked immunosorbent assay)技術,併利用此技術對海南島283箇疑似感病的番木瓜樣品進行檢測鑒彆,初步掌握瞭海南島3種主要番木瓜病毒的分佈及感病情況,為下一步該病的有效防治策略提供科學依據.
이용PCR방법분별확증번목과배반병독(papaya ringspot virus,PRSV)、번목과기형화협병독(papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)화번목과화협병(papaya mosaic virus,PaMV)적외각단백(coat protein,CP)기인,병련접도원핵표체재체pET-28a상,획득중조질립pET28-PRSV-CP、pET28-PLDMV-CP화pET28-PaMV-CP,통과전화、유도표체후,경SDS-PAGE분석현시,저3충CP단백재대장간균중고효표체,기중PRSV CP단백화PLDMV CP이포함체형식존재,PaMV CP이가용단백형식존재.이용Ni2+-NTA경지당친화층석순화획득료3충병독적중조CP단백,병면역대백토획득고효개적항체.Western blot검측결과표명,저3충항혈청여대응적유도표체단백발생특이반응.재채용항혈청건립일충쾌첩、간편화저성본적ID-ELISA (Indirect enzyme-linked immunosorbent assay)기술,병이용차기술대해남도283개의사감병적번목과양품진행검측감별,초보장악료해남도3충주요번목과병독적분포급감병정황,위하일보해병적유효방치책략제공과학의거.
