西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica
2015年
10期
1925-1933
,共9页
徐晟%江宜龙%蒋明敏%卜多%傅江燕%夏冰%汪仁
徐晟%江宜龍%蔣明敏%蔔多%傅江燕%夏冰%汪仁
서성%강의룡%장명민%복다%부강연%하빙%왕인
石蒜%P5CS%脯氨酸%序列分析
石蒜%P5CS%脯氨痠%序列分析
석산%P5CS%포안산%서렬분석
Lycoris radiata%P5CS%proline%sequence analysis
△1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)是植物渗透胁迫下谷氨酸途径合成脯氨酸的关键酶.该研究以石蒜(Ly-coris radiata)为材料,采用同源克隆、RACE方法结合RT-PCR技术克隆获得LrP5CS基因全长cDNA序列.序列分析表明,LrP5CS基因全长2 521 bp,其中开放阅读框(ORF)为2 139 bp,编码713个氨基酸,预测编码蛋白质的分子量为77.19 kD,等电点为6.34;LrP5CS是1个稳定的疏水蛋白,不含信号肽,不具有跨膜结构,具有AAK超基因家族和ALDH-SF超基因家族的保守结构域.氨基酸序列比对和系统进化树分析发现,LrP5CS与植物其他P5CS蛋白具有较高的一致性,且与海枣PdP5CS及油棕EgP5CS聚为一类,亲缘关系最近.实时荧光定量PCR分析结果表明,LrP5CS在根、鳞茎和叶片中均有表达,其中在鳞茎中的表达量最高.LrP5CS在20％聚乙二醇(PEG)处理下的表达模式分析发现,LrP5CS受PEG胁迫处理的诱导表达,其基因相对表达量在处理后6h达到最高;随着处理时间的延长,LrP5CS基因相对表达量水平逐渐下调至对照水平.将LrP5CS连接到表达载体pET-28a上,转化获得LrP5CS编码基因的大肠杆菌BL21 (DE3)工程菌,通过IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物发现成功表达目的蛋白.该研究结果为进一步分析LrP5CS基因功能及石蒜抗逆分子育种奠定了基础.
△1-吡咯啉-5-羧痠閤成酶(P5CS)是植物滲透脅迫下穀氨痠途徑閤成脯氨痠的關鍵酶.該研究以石蒜(Ly-coris radiata)為材料,採用同源剋隆、RACE方法結閤RT-PCR技術剋隆穫得LrP5CS基因全長cDNA序列.序列分析錶明,LrP5CS基因全長2 521 bp,其中開放閱讀框(ORF)為2 139 bp,編碼713箇氨基痠,預測編碼蛋白質的分子量為77.19 kD,等電點為6.34;LrP5CS是1箇穩定的疏水蛋白,不含信號肽,不具有跨膜結構,具有AAK超基因傢族和ALDH-SF超基因傢族的保守結構域.氨基痠序列比對和繫統進化樹分析髮現,LrP5CS與植物其他P5CS蛋白具有較高的一緻性,且與海棘PdP5CS及油棕EgP5CS聚為一類,親緣關繫最近.實時熒光定量PCR分析結果錶明,LrP5CS在根、鱗莖和葉片中均有錶達,其中在鱗莖中的錶達量最高.LrP5CS在20％聚乙二醇(PEG)處理下的錶達模式分析髮現,LrP5CS受PEG脅迫處理的誘導錶達,其基因相對錶達量在處理後6h達到最高;隨著處理時間的延長,LrP5CS基因相對錶達量水平逐漸下調至對照水平.將LrP5CS連接到錶達載體pET-28a上,轉化穫得LrP5CS編碼基因的大腸桿菌BL21 (DE3)工程菌,通過IPTG誘導錶達,SDS-PAGE分析錶達產物髮現成功錶達目的蛋白.該研究結果為進一步分析LrP5CS基因功能及石蒜抗逆分子育種奠定瞭基礎.
△1-필각람-5-최산합성매(P5CS)시식물삼투협박하곡안산도경합성포안산적관건매.해연구이석산(Ly-coris radiata)위재료,채용동원극륭、RACE방법결합RT-PCR기술극륭획득LrP5CS기인전장cDNA서렬.서렬분석표명,LrP5CS기인전장2 521 bp,기중개방열독광(ORF)위2 139 bp,편마713개안기산,예측편마단백질적분자량위77.19 kD,등전점위6.34;LrP5CS시1개은정적소수단백,불함신호태,불구유과막결구,구유AAK초기인가족화ALDH-SF초기인가족적보수결구역.안기산서렬비대화계통진화수분석발현,LrP5CS여식물기타P5CS단백구유교고적일치성,차여해조PdP5CS급유종EgP5CS취위일류,친연관계최근.실시형광정량PCR분석결과표명,LrP5CS재근、린경화협편중균유표체,기중재린경중적표체량최고.LrP5CS재20％취을이순(PEG)처리하적표체모식분석발현,LrP5CS수PEG협박처리적유도표체,기기인상대표체량재처리후6h체도최고;수착처리시간적연장,LrP5CS기인상대표체량수평축점하조지대조수평.장LrP5CS련접도표체재체pET-28a상,전화획득LrP5CS편마기인적대장간균BL21 (DE3)공정균,통과IPTG유도표체,SDS-PAGE분석표체산물발현성공표체목적단백.해연구결과위진일보분석LrP5CS기인공능급석산항역분자육충전정료기출.
