中国循环杂志
中國循環雜誌
중국순배잡지
Chinese Circulation Journal
2015年
11期
1096-1100
,共5页
刘燃%宋蕊%袁丽%凌露%杨萍%郭家智%张戈%陆地%孙林
劉燃%宋蕊%袁麗%凌露%楊萍%郭傢智%張戈%陸地%孫林
류연%송예%원려%릉로%양평%곽가지%장과%륙지%손림
人参皂苷Rg1%磷脂酰肌醇3激酶%缺氧诱导因子-1α%内质网应激%凋亡
人參皂苷Rg1%燐脂酰肌醇3激酶%缺氧誘導因子-1α%內質網應激%凋亡
인삼조감Rg1%린지선기순3격매%결양유도인자-1α%내질망응격%조망
Ginsenoside-rg1%Phosphoinositide-3 kinase%Hypoxia inducible factor-1α%Endoplasmic reticulum stress%Apoptosis
目的：从细胞和分子层面探讨人参皂苷Rg1（G-Rg1）对心肌细胞的影响及其信号传导机制。<br> 方法：体外培养大鼠H9c2心肌细胞，按实验要求随机分13组，每组5个平行孔，分别为空白对照组，单纯缺血缺氧2 h、6 h、12 h、24 h、48 h组，G-Rg15μmol/L、10μmol/L、50μmol/L组，缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的特异性抑制剂（YC-1）组，YC-1+G-Rg1组，蛋白激酶B（Akt）蛋白的磷酸化特异性抑制剂（Wortmannin）组， Wortmannin+G-Rg1组。检测G-Rg1、缺血缺氧以及YC-1对心肌细胞活力及心肌细胞损伤的影响。同时用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测心肌细胞内HIF-1α、葡萄糖载体蛋白-1（GLUT-1）和血红素氧合酶-1（HO-1）的信使核糖核酸mRNA表达水平变化。用蛋白质免疫印迹法检测HIF-1α、GLUT-1和HO-1、活化转录因子-6（ATF-6）、抑制CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）和Akt等细胞信号通路蛋白表达水平变化。<br> 结果：缺血缺氧时间与心肌细胞活力呈负相关（r=-0.8580，P<0.05），与乳酸脱氢酶溢出率呈正相关（r=0.9201， P<0.05）。G-Rg110μmol/L组较单纯缺血缺氧24 h组细胞活力明显回升（87.8%、62.6%，P<0.05），细胞培养上清乳酸脱氢酶（LDH）含量明显减少（25.0%、74.8%，P<0.05），且上调了HIF-1α、GLUT-1、HO-1的mRNA表达水平（P<0.05）。蛋白质免疫印迹法分析显示：YC-1+G-Rg1组较G-Rg1组，心肌细胞活力下降（68.0%，87.8%，P<0.05），细胞培养上清LDH含量增加（56.4%，25.0%，P<0.05），同时YC-1拮抗了G-Rg1对HIF-1α、GLUT-1、HO-1、ATF-6和CHOP的蛋白表达水平的调控（P<0.05）；Wortmannin可拮抗G-Rg1对HIF-1α和CHOP的蛋白表达水平的调控（P<0.05），及对Akt两个磷酸化位点的激活作用（P<0.05）。<br> 结论：心肌细胞损伤程度与缺血缺氧时间有关；G-Rg1对心肌细胞具有保护作用，其机制激活HIF-1α及其下游因子的表达并抑制了内质网应激效应，可能与G-Rg1激活Akt有关。
目的：從細胞和分子層麵探討人參皂苷Rg1（G-Rg1）對心肌細胞的影響及其信號傳導機製。<br> 方法：體外培養大鼠H9c2心肌細胞，按實驗要求隨機分13組，每組5箇平行孔，分彆為空白對照組，單純缺血缺氧2 h、6 h、12 h、24 h、48 h組，G-Rg15μmol/L、10μmol/L、50μmol/L組，缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）的特異性抑製劑（YC-1）組，YC-1+G-Rg1組，蛋白激酶B（Akt）蛋白的燐痠化特異性抑製劑（Wortmannin）組， Wortmannin+G-Rg1組。檢測G-Rg1、缺血缺氧以及YC-1對心肌細胞活力及心肌細胞損傷的影響。同時用逆轉錄聚閤酶鏈反應（RT-PCR）檢測心肌細胞內HIF-1α、葡萄糖載體蛋白-1（GLUT-1）和血紅素氧閤酶-1（HO-1）的信使覈糖覈痠mRNA錶達水平變化。用蛋白質免疫印跡法檢測HIF-1α、GLUT-1和HO-1、活化轉錄因子-6（ATF-6）、抑製CCAAT/增彊子結閤蛋白同源蛋白（CHOP）和Akt等細胞信號通路蛋白錶達水平變化。<br> 結果：缺血缺氧時間與心肌細胞活力呈負相關（r=-0.8580，P<0.05），與乳痠脫氫酶溢齣率呈正相關（r=0.9201， P<0.05）。G-Rg110μmol/L組較單純缺血缺氧24 h組細胞活力明顯迴升（87.8%、62.6%，P<0.05），細胞培養上清乳痠脫氫酶（LDH）含量明顯減少（25.0%、74.8%，P<0.05），且上調瞭HIF-1α、GLUT-1、HO-1的mRNA錶達水平（P<0.05）。蛋白質免疫印跡法分析顯示：YC-1+G-Rg1組較G-Rg1組，心肌細胞活力下降（68.0%，87.8%，P<0.05），細胞培養上清LDH含量增加（56.4%，25.0%，P<0.05），同時YC-1拮抗瞭G-Rg1對HIF-1α、GLUT-1、HO-1、ATF-6和CHOP的蛋白錶達水平的調控（P<0.05）；Wortmannin可拮抗G-Rg1對HIF-1α和CHOP的蛋白錶達水平的調控（P<0.05），及對Akt兩箇燐痠化位點的激活作用（P<0.05）。<br> 結論：心肌細胞損傷程度與缺血缺氧時間有關；G-Rg1對心肌細胞具有保護作用，其機製激活HIF-1α及其下遊因子的錶達併抑製瞭內質網應激效應，可能與G-Rg1激活Akt有關。
목적：종세포화분자층면탐토인삼조감Rg1（G-Rg1）대심기세포적영향급기신호전도궤제。<br> 방법：체외배양대서H9c2심기세포，안실험요구수궤분13조，매조5개평행공，분별위공백대조조，단순결혈결양2 h、6 h、12 h、24 h、48 h조，G-Rg15μmol/L、10μmol/L、50μmol/L조，결양유도인자-1α（HIF-1α）적특이성억제제（YC-1）조，YC-1+G-Rg1조，단백격매B（Akt）단백적린산화특이성억제제（Wortmannin）조， Wortmannin+G-Rg1조。검측G-Rg1、결혈결양이급YC-1대심기세포활력급심기세포손상적영향。동시용역전록취합매련반응（RT-PCR）검측심기세포내HIF-1α、포도당재체단백-1（GLUT-1）화혈홍소양합매-1（HO-1）적신사핵당핵산mRNA표체수평변화。용단백질면역인적법검측HIF-1α、GLUT-1화HO-1、활화전록인자-6（ATF-6）、억제CCAAT/증강자결합단백동원단백（CHOP）화Akt등세포신호통로단백표체수평변화。<br> 결과：결혈결양시간여심기세포활력정부상관（r=-0.8580，P<0.05），여유산탈경매일출솔정정상관（r=0.9201， P<0.05）。G-Rg110μmol/L조교단순결혈결양24 h조세포활력명현회승（87.8%、62.6%，P<0.05），세포배양상청유산탈경매（LDH）함량명현감소（25.0%、74.8%，P<0.05），차상조료HIF-1α、GLUT-1、HO-1적mRNA표체수평（P<0.05）。단백질면역인적법분석현시：YC-1+G-Rg1조교G-Rg1조，심기세포활력하강（68.0%，87.8%，P<0.05），세포배양상청LDH함량증가（56.4%，25.0%，P<0.05），동시YC-1길항료G-Rg1대HIF-1α、GLUT-1、HO-1、ATF-6화CHOP적단백표체수평적조공（P<0.05）；Wortmannin가길항G-Rg1대HIF-1α화CHOP적단백표체수평적조공（P<0.05），급대Akt량개린산화위점적격활작용（P<0.05）。<br> 결론：심기세포손상정도여결혈결양시간유관；G-Rg1대심기세포구유보호작용，기궤제격활HIF-1α급기하유인자적표체병억제료내질망응격효응，가능여G-Rg1격활Akt유관。
Objective: To investigate the effect of ginsenoside-rg1 (G-Rg1) on rat’s cardiomyocytes H9c2 with its mechanism of signal pathwayin vitro. <br> Methods: H9c2 cells were cultured and treated in different conditions by following groups:①Blank control group,②Hypoxia alone group, the cells were treated for (2, 6, 12, 24, 48) hr respectively,③G-Rg1 group, the cells were treated by G-Rg1 at (5, 10, 50) μmol/L respectively,④YC-1 group, which is the speciifc inhibitor of hypoxia inducible factor-1α (HIF-1α),⑤YC-1 + G-Rg1 group,⑥Wortmannin group, which is the speciifc inhibitor for protein kinase B (Akt) phosphorylation and⑦Wortmannin + G-Rg1 group. Each experiment was conducted with 5 replicates. The effects of G-Rg1, hypoxia and YC-1 on cell activity and injury were studied; intracellular mRNA expressions of HIF-1α, glucose transporter-1 (GLUT-1) and heme oxygenase-1 (HO-1) were examined by RT-PCR; protein expressions of HIF-1α, GLUT-1, HO-1, activating transcription factor-6 (ATF-6), CCAAT/enhancer binding protein homologous protein (CHOP) and Akt with its signal pathway factors were measured by Western blot analysis. <br> Results: The time of hypoxia was negatively related to cell activity (r=-0.8580,P<0.05) and positively related to LDH overlfow rate (r=0.9201,P<0.05). G-Rg1 (10μmol/L) group showed increased cell activity than Hypoxia alone (24 hr) group (87.8% vs 62.6 %,P<0.05), while decreased LDH overlfow (25.0% vs 74.8%,P<0.05), and up-regulated mRNA expressions of HIF-1α, GLUT-1 and HO-1, P<0.05. YC-1+ G-Rg1 group had decreased cell activity than G-Rg1 group (68.0% vs 87.8%,P<0.05), while increased LDH overlfow (56.4% vs 25.0%,P<0.05). Meanwhile, YC-1 clashed the effect of G-Rg1 on protein expressions of HIF-1α, GLUT-1, HO-1, ATF-6 and CHOP,P<0.05; wortmannin clashed the effect of G-Rg1 on protein expressions of HIF-1α, CHOP,P<0.05 and suppressed the two phosphorylation sites for Akt activation,P<0.05. <br> Conclusion: G-Rg1 may protect rat’s H9c2 cellsin vitro by activating expressions of HIF-1α with its downstream factors and inhibiting endoplasmic reticulum stress, which might be related to the effect of G-Rg1 on Akt activation.
