基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
Basic & Clinical Medicine
2015年
11期
1447-1452
,共6页
李开济%郝晓方%章广玲%魏静波%魏洁%林雅军%甄永占
李開濟%郝曉方%章廣玲%魏靜波%魏潔%林雅軍%甄永佔
리개제%학효방%장엄령%위정파%위길%림아군%견영점
KNDC1%腺病毒%同源重组%脐静脉内皮细胞
KNDC1%腺病毒%同源重組%臍靜脈內皮細胞
KNDC1%선병독%동원중조%제정맥내피세포
KNDC1%adenoviruses%homologous recombination%human umbilical vein endothelial cells
目的 构建人KNDC1腺病毒表达载体,观察其在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达及功能.方法 扩增KNDC1基因并与腺病毒骨架载体进行体外重组连接,经筛选、测序确认后转染进HEK293A细胞进行包装;按pAd-enoX试剂盒的步骤纯化重组腺病毒,通过终点稀释法测定病毒滴度;用pAdeno X-KNDC1感染HUVEC,48 h后用Western blot检测KNDC1蛋白表达水平;用SA-β-gal染色检测细胞衰老情况.结果 经测序确认目的基因KNDC1成功克隆入腺病毒载体中.转染HEK293A细胞后观察到细胞变圆、部分细胞漂浮的特征性病变效应,病毒滴度达到1×1011 PFU.感染了pAdeno X-KNDC1的HUVEC中KNDC1蛋白表达水平显著升高(P＜0.05).随着pAdenoX-KNDC1剂量的增加,衰老HUVEC数量增多.结论 人KNDC1腺病毒表达载体构建成功并能促进HUVEC衰老.
目的 構建人KNDC1腺病毒錶達載體,觀察其在人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)中的錶達及功能.方法 擴增KNDC1基因併與腺病毒骨架載體進行體外重組連接,經篩選、測序確認後轉染進HEK293A細胞進行包裝;按pAd-enoX試劑盒的步驟純化重組腺病毒,通過終點稀釋法測定病毒滴度;用pAdeno X-KNDC1感染HUVEC,48 h後用Western blot檢測KNDC1蛋白錶達水平;用SA-β-gal染色檢測細胞衰老情況.結果 經測序確認目的基因KNDC1成功剋隆入腺病毒載體中.轉染HEK293A細胞後觀察到細胞變圓、部分細胞漂浮的特徵性病變效應,病毒滴度達到1×1011 PFU.感染瞭pAdeno X-KNDC1的HUVEC中KNDC1蛋白錶達水平顯著升高(P＜0.05).隨著pAdenoX-KNDC1劑量的增加,衰老HUVEC數量增多.結論 人KNDC1腺病毒錶達載體構建成功併能促進HUVEC衰老.
목적 구건인KNDC1선병독표체재체,관찰기재인제정맥내피세포(HUVEC)중적표체급공능.방법 확증KNDC1기인병여선병독골가재체진행체외중조련접,경사선、측서학인후전염진HEK293A세포진행포장;안pAd-enoX시제합적보취순화중조선병독,통과종점희석법측정병독적도;용pAdeno X-KNDC1감염HUVEC,48 h후용Western blot검측KNDC1단백표체수평;용SA-β-gal염색검측세포쇠로정황.결과 경측서학인목적기인KNDC1성공극륭입선병독재체중.전염HEK293A세포후관찰도세포변원、부분세포표부적특정성병변효응,병독적도체도1×1011 PFU.감염료pAdeno X-KNDC1적HUVEC중KNDC1단백표체수평현저승고(P＜0.05).수착pAdenoX-KNDC1제량적증가,쇠로HUVEC수량증다.결론 인KNDC1선병독표체재체구건성공병능촉진HUVEC쇠로.
