基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
Basic & Clinical Medicine
2015年
11期
1453-1459
,共7页
凋亡诱导因子%细胞凋亡%腺病毒载体%K562细胞
凋亡誘導因子%細胞凋亡%腺病毒載體%K562細胞
조망유도인자%세포조망%선병독재체%K562세포
apoptosis-inducing factor%cell apoptosis%recombinant adenovirus%K562 cells
目的 构建凋亡诱导因子(Ad-AIF)及其突变体的重组腺病毒(Ad-DMLS-AIF和Ad-DHBD-AIF),观察其对白血病K562细胞凋亡的影响.方法 扩增AIF、DMLS-AIF和DHBD-AIF片段,分别克隆至pAd-Track-CMV-HA质粒中,经过PCR、双酶切和测序鉴定后,分别与pAd-Easy1质粒重组得到腺病毒质粒,经包装和扩增后得到腺病毒,以无外源序列的腺病毒作为空载腺病毒.Western blot验证重组腺病毒在K562细胞中的表达,免疫共沉淀检测AIF、DMLS-AIF和DHBD-AIF是否与HSP70相结合,Hoechst33258染色和流式细胞术检测AIF、DMLS-AIF和DHBD-AIF对K562细胞凋亡的影响.结果 重组腺病毒构建成功,能够在K562细胞中表达;AIF和DMLS-AIF与HSP70相结合,DHBD-AIF不结合HSP70;Ad-DHBD-AIF引起K562细胞染色质凝集,而Ad-AIF和Ad-DMLS-AIF处理的K562细胞染色质分布均匀;Ad-DHBD-AIF引起K562细胞凋亡数明显高于Ad-AIF和Ad-DMLS-AIF(P＜0.05).结论 成功构建了腺病毒Ad-AIF、Ad-DMLS-AIF和Ad-DHBD-AIF,其中Ad-DHBD-AIF对K562细胞的凋亡影响明显高于Ad-AIF和Ad-DMLS-AIF,为K562细胞凋亡受阻的进一步研究奠定了基础.
目的 構建凋亡誘導因子(Ad-AIF)及其突變體的重組腺病毒(Ad-DMLS-AIF和Ad-DHBD-AIF),觀察其對白血病K562細胞凋亡的影響.方法 擴增AIF、DMLS-AIF和DHBD-AIF片段,分彆剋隆至pAd-Track-CMV-HA質粒中,經過PCR、雙酶切和測序鑒定後,分彆與pAd-Easy1質粒重組得到腺病毒質粒,經包裝和擴增後得到腺病毒,以無外源序列的腺病毒作為空載腺病毒.Western blot驗證重組腺病毒在K562細胞中的錶達,免疫共沉澱檢測AIF、DMLS-AIF和DHBD-AIF是否與HSP70相結閤,Hoechst33258染色和流式細胞術檢測AIF、DMLS-AIF和DHBD-AIF對K562細胞凋亡的影響.結果 重組腺病毒構建成功,能夠在K562細胞中錶達;AIF和DMLS-AIF與HSP70相結閤,DHBD-AIF不結閤HSP70;Ad-DHBD-AIF引起K562細胞染色質凝集,而Ad-AIF和Ad-DMLS-AIF處理的K562細胞染色質分佈均勻;Ad-DHBD-AIF引起K562細胞凋亡數明顯高于Ad-AIF和Ad-DMLS-AIF(P＜0.05).結論 成功構建瞭腺病毒Ad-AIF、Ad-DMLS-AIF和Ad-DHBD-AIF,其中Ad-DHBD-AIF對K562細胞的凋亡影響明顯高于Ad-AIF和Ad-DMLS-AIF,為K562細胞凋亡受阻的進一步研究奠定瞭基礎.
목적 구건조망유도인자(Ad-AIF)급기돌변체적중조선병독(Ad-DMLS-AIF화Ad-DHBD-AIF),관찰기대백혈병K562세포조망적영향.방법 확증AIF、DMLS-AIF화DHBD-AIF편단,분별극륭지pAd-Track-CMV-HA질립중,경과PCR、쌍매절화측서감정후,분별여pAd-Easy1질립중조득도선병독질립,경포장화확증후득도선병독,이무외원서렬적선병독작위공재선병독.Western blot험증중조선병독재K562세포중적표체,면역공침정검측AIF、DMLS-AIF화DHBD-AIF시부여HSP70상결합,Hoechst33258염색화류식세포술검측AIF、DMLS-AIF화DHBD-AIF대K562세포조망적영향.결과 중조선병독구건성공,능구재K562세포중표체;AIF화DMLS-AIF여HSP70상결합,DHBD-AIF불결합HSP70;Ad-DHBD-AIF인기K562세포염색질응집,이Ad-AIF화Ad-DMLS-AIF처리적K562세포염색질분포균균;Ad-DHBD-AIF인기K562세포조망수명현고우Ad-AIF화Ad-DMLS-AIF(P＜0.05).결론 성공구건료선병독Ad-AIF、Ad-DMLS-AIF화Ad-DHBD-AIF,기중Ad-DHBD-AIF대K562세포적조망영향명현고우Ad-AIF화Ad-DMLS-AIF,위K562세포조망수조적진일보연구전정료기출.
