CAJ | 학술논문

[目的]建立检测不同性别水牛染色体AMEL基因位点差异的PCR鉴别方法,为水牛早期胚胎性别鉴定及水牛分离精子重分析提供简便可靠的检验手段.[方法]采用PCR扩增不同性别水牛染色体中的AMEL基因,CloneManager 9.0软件分析序列差异,BLASTn程序分析基因同源性,MEGA 6.06软件构建系统发育进化树.[结果]以水牛血液基因组DNA为模板、amelB1为引物,引物退火温度60℃,公水牛可扩增出两条清晰条带,长度分别为376(AMEL-X基因)和304 bp(AMEL-Y基因);母水牛仅扩增出1条清晰条带,长度为376 bp(AMEL-X基因).与AMEL-X基因相比,水牛AMEL-Y基因缺失155～226区域的72 bp,同时存在20个基因型多态位点.临床检测结果证实,基于AMEL基因的PCR鉴别结果与实际性别的吻合率达100％,amelB1引物的灵敏度为0.5 ng模板量.BLASTn比对分析结果显示,水牛AMEL-X和AMEL-Y基因与不同哺乳动物的对应序列存在高度保守性,其相似性均接近或高于90％,与牛存在最近的亲缘关系.[结论]AMEL基因在哺乳动物中高度保守,且在不同性别水牛中呈多态性特征,以其作为分子靶标建立的水牛性别PCR鉴定方法切实可行,为水牛早期胚胎性别鉴定及水牛分离精子重分析提供了一个更便捷、高效的检验手段.
[목적]건립검측불동성별수우염색체AMEL기인위점차이적PCR감별방법,위수우조기배태성별감정급수우분리정자중분석제공간편가고적검험수단.[방법]채용PCR확증불동성별수우염색체중적AMEL기인,CloneManager 9.0연건분석서렬차이,BLASTn정서분석기인동원성,MEGA 6.06연건구건계통발육진화수.[결과]이수우혈액기인조DNA위모판、amelB1위인물,인물퇴화온도60℃,공수우가확증출량조청석조대,장도분별위376(AMEL-X기인)화304 bp(AMEL-Y기인);모수우부확증출1조청석조대,장도위376 bp(AMEL-X기인).여AMEL-X기인상비,수우AMEL-Y기인결실155～226구역적72 bp,동시존재20개기인형다태위점.림상검측결과증실,기우AMEL기인적PCR감별결과여실제성별적문합솔체100％,amelB1인물적령민도위0.5 ng모판량.BLASTn비대분석결과현시,수우AMEL-X화AMEL-Y기인여불동포유동물적대응서렬존재고도보수성,기상사성균접근혹고우90％,여우존재최근적친연관계.[결론]AMEL기인재포유동물중고도보수,차재불동성별수우중정다태성특정,이기작위분자파표건립적수우성별PCR감정방법절실가행,위수우조기배태성별감정급수우분리정자중분석제공료일개경편첩、고효적검험수단.