中国兽医杂志
中國獸醫雜誌
중국수의잡지
Chinese Journal of Veterinary Medicine
2015年
10期
38-41
,共4页
张传美%王颖%秦晓冰%杨海燕%秦志华%单虎
張傳美%王穎%秦曉冰%楊海燕%秦誌華%單虎
장전미%왕영%진효빙%양해연%진지화%단호
绿脓杆菌%toxA基因%克隆%序列分析%原核表达
綠膿桿菌%toxA基因%剋隆%序列分析%原覈錶達
록농간균%toxA기인%극륭%서렬분석%원핵표체
为了研究貂源绿脓杆菌流行株toxA基因的遗传变异情况,并将toxA基因进行原核表达,本试验以貂源绿脓杆菌DNA为模板,经PCR扩增表达外毒素A蛋白的toxA基因,约1917 bp的片段,将产物克隆与pM D-18T载体并测序.结果表明,12株流行株的序列与GenBank中的标准产毒株PA103株和PA01株的遗传关系较近,显示外毒素A毒性的氨基酸均未发生突变,流行株变异不大.将该基因亚克隆到原核表达载体pET32a,转化BL21(DE3)感受态细胞,经不同浓度的IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE与Western Blot鉴定,结果表明,可产生相对分子量约为78 kDa的表达产物,成功地构建了外毒素A蛋白的重组表达系统.
為瞭研究貂源綠膿桿菌流行株toxA基因的遺傳變異情況,併將toxA基因進行原覈錶達,本試驗以貂源綠膿桿菌DNA為模闆,經PCR擴增錶達外毒素A蛋白的toxA基因,約1917 bp的片段,將產物剋隆與pM D-18T載體併測序.結果錶明,12株流行株的序列與GenBank中的標準產毒株PA103株和PA01株的遺傳關繫較近,顯示外毒素A毒性的氨基痠均未髮生突變,流行株變異不大.將該基因亞剋隆到原覈錶達載體pET32a,轉化BL21(DE3)感受態細胞,經不同濃度的IPTG誘導錶達,錶達產物進行SDS-PAGE與Western Blot鑒定,結果錶明,可產生相對分子量約為78 kDa的錶達產物,成功地構建瞭外毒素A蛋白的重組錶達繫統.
위료연구초원록농간균류행주toxA기인적유전변이정황,병장toxA기인진행원핵표체,본시험이초원록농간균DNA위모판,경PCR확증표체외독소A단백적toxA기인,약1917 bp적편단,장산물극륭여pM D-18T재체병측서.결과표명,12주류행주적서렬여GenBank중적표준산독주PA103주화PA01주적유전관계교근,현시외독소A독성적안기산균미발생돌변,류행주변이불대.장해기인아극륭도원핵표체재체pET32a,전화BL21(DE3)감수태세포,경불동농도적IPTG유도표체,표체산물진행SDS-PAGE여Western Blot감정,결과표명,가산생상대분자량약위78 kDa적표체산물,성공지구건료외독소A단백적중조표체계통.
