浙江大学学报（农业与生命科学版）
浙江大學學報（農業與生命科學版）
절강대학학보（농업여생명과학판）
Journal of Zhejiang University(Agriculture & Life Sciences)
2015年
5期
497-504
,共8页
谯天敏%张静%麻文建%朱天辉%郑磊
譙天敏%張靜%痳文建%硃天輝%鄭磊
초천민%장정%마문건%주천휘%정뢰
巢式聚合酶链反应%桉树焦枯病%快速检测%丽赤壳属%柱枝双孢霉
巢式聚閤酶鏈反應%桉樹焦枯病%快速檢測%麗赤殼屬%柱枝雙孢黴
소식취합매련반응%안수초고병%쾌속검측%려적각속%주지쌍포매
nested polymerase chain reaction%Eucalyptus dieback%rapid detection%Calonectria%Cylindrocladium scoparium
桉树焦枯病是威胁桉树生长的首要病害,建立准确、有效的桉树焦枯病巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)快速检测技术是桉树焦枯病前期诊断的必要手段.本研究针对柱枝双孢霉(Cylindrocladium scoparium)菌株的β-微管蛋白(beta-tubulin)基因上保守序列极强的靶基因区域序列进行特异性引物BT-S-1/BT-A-1的设计和通用引物BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A的合成,分别利用常规PCR和巢式PCR技术对引物特异性和灵敏度进行检测和比较,同时本研究也对所建立的巢式PCR用于桉树焦枯病原菌快速检测的田间时效性进行验证.试验结果表明:利用beta-tubulin基因序列通用引物BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A对全部供试菌株进行扩增,所有参试菌株均可扩增出1条约500 bp的条带;而单独使用特异性引物BT-S-1/BT-A-1进行常规PCR扩增时仅病原菌能够扩增出1条148 bp的明亮条带;当利用通用引物作为第1轮引物,以稀释10倍后的第1轮PCR产物作为第2轮PCR模板,利用特异性引物进行巢式PCR扩增时,也可扩增出上述148 bp大小的明亮条带,且巢式PCR的扩增效果较常规PCR具有明显的视觉优越性;灵敏度检测试验表明,巢式PCR的灵敏度可检测到5 fg/μL,较常规PCR可以扩增出的极限(DNA质量浓度为5 pg/μL)至少提高了103倍;田间时效检测试验也说明巢式PCR较常规PCR具有更高的准确度和灵敏性,可达到田间检测的要求.本研究建立的巢式PCR检测技术可有效应用于桉树焦枯病的早期诊断.
桉樹焦枯病是威脅桉樹生長的首要病害,建立準確、有效的桉樹焦枯病巢式聚閤酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)快速檢測技術是桉樹焦枯病前期診斷的必要手段.本研究針對柱枝雙孢黴(Cylindrocladium scoparium)菌株的β-微管蛋白(beta-tubulin)基因上保守序列極彊的靶基因區域序列進行特異性引物BT-S-1/BT-A-1的設計和通用引物BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A的閤成,分彆利用常規PCR和巢式PCR技術對引物特異性和靈敏度進行檢測和比較,同時本研究也對所建立的巢式PCR用于桉樹焦枯病原菌快速檢測的田間時效性進行驗證.試驗結果錶明:利用beta-tubulin基因序列通用引物BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A對全部供試菌株進行擴增,所有參試菌株均可擴增齣1條約500 bp的條帶;而單獨使用特異性引物BT-S-1/BT-A-1進行常規PCR擴增時僅病原菌能夠擴增齣1條148 bp的明亮條帶;噹利用通用引物作為第1輪引物,以稀釋10倍後的第1輪PCR產物作為第2輪PCR模闆,利用特異性引物進行巢式PCR擴增時,也可擴增齣上述148 bp大小的明亮條帶,且巢式PCR的擴增效果較常規PCR具有明顯的視覺優越性;靈敏度檢測試驗錶明,巢式PCR的靈敏度可檢測到5 fg/μL,較常規PCR可以擴增齣的極限(DNA質量濃度為5 pg/μL)至少提高瞭103倍;田間時效檢測試驗也說明巢式PCR較常規PCR具有更高的準確度和靈敏性,可達到田間檢測的要求.本研究建立的巢式PCR檢測技術可有效應用于桉樹焦枯病的早期診斷.
안수초고병시위협안수생장적수요병해,건립준학、유효적안수초고병소식취합매련반응(polymerase chain reaction, PCR)쾌속검측기술시안수초고병전기진단적필요수단.본연구침대주지쌍포매(Cylindrocladium scoparium)균주적β-미관단백(beta-tubulin)기인상보수서렬겁강적파기인구역서렬진행특이성인물BT-S-1/BT-A-1적설계화통용인물BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A적합성,분별이용상규PCR화소식PCR기술대인물특이성화령민도진행검측화비교,동시본연구야대소건립적소식PCR용우안수초고병원균쾌속검측적전간시효성진행험증.시험결과표명:이용beta-tubulin기인서렬통용인물BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A대전부공시균주진행확증,소유삼시균주균가확증출1조약500 bp적조대;이단독사용특이성인물BT-S-1/BT-A-1진행상규PCR확증시부병원균능구확증출1조148 bp적명량조대;당이용통용인물작위제1륜인물,이희석10배후적제1륜PCR산물작위제2륜PCR모판,이용특이성인물진행소식PCR확증시,야가확증출상술148 bp대소적명량조대,차소식PCR적확증효과교상규PCR구유명현적시각우월성;령민도검측시험표명,소식PCR적령민도가검측도5 fg/μL,교상규PCR가이확증출적겁한(DNA질량농도위5 pg/μL)지소제고료103배;전간시효검측시험야설명소식PCR교상규PCR구유경고적준학도화령민성,가체도전간검측적요구.본연구건립적소식PCR검측기술가유효응용우안수초고병적조기진단.
