首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
Journal of Capital Medical University
2015年
5期
734-739
,共6页
杨兆菲%王勇%杨俭%汪璇%王晓民
楊兆菲%王勇%楊儉%汪璇%王曉民
양조비%왕용%양검%왕선%왕효민
左旋多巴%单胺氧化酶B%DNA甲基化%基因转录
左鏇多巴%單胺氧化酶B%DNA甲基化%基因轉錄
좌선다파%단알양화매B%DNA갑기화%기인전록
L-3,4-dihydroxyphenylalanine%monoamine oxidase B%DNA methylation%gene transcription
目的 探究左旋多巴(L-3,4-dihydroxyphenylalanine,L-DOPA)对多巴胺代谢关键基因单胺氧化酶B(monoamine oxidase B,MAO-B)转录的影响及其表观遗传学调控机制.方法 以人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞作为研究对象,应用基因组甲基化定量试剂盒检测L-DOPA对基因组甲基化的影响;采用半定量RT-PCR方法探究L-DOPA和DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)对MAO-B转录的影响;应用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)技术检测L-DOPA对MAO-B基因启动子区CpG岛甲基化程度的影响.结果 ①L-DOPA(2μmol/L和20μmol/L)和50 μmol/L 5-aza-dC处理SH-SY5Y细胞24 h均会使其基因组甲基化降低.②L-DOPA(2μmol/L和20 μmol/L)处理SH-SY5Y细胞24 h会使MAO-BmRNA下调,而多巴脱羧酶(DOPA-decarboxylase,DDC)和儿茶酚胺氧位甲基转移酶(eatechol-O-methyhransferase,COMT)转录无明显变化.③不同浓度5-aza-dC(0、50、100和150 μmol/L)处理细胞24 h,MAO-B mRNA表达明显上调,DDC和COMT转录无明显变化,提示MAO-B可能受到DNA甲基化调控.④L-DOPA处理可使MAO-B基因启动子区CpG岛甲基化升高,而5-aza-dC可使该区域CpG岛甲基化降低,说明该区域甲基化受L-DOPA影响而升高,并可能是MAO-B基因转录活性下调的原因.结论 L-DOPA可能对MAO-B基因的转录活性有抑制作用,且可能是通过L-DOPA诱导的高CpG甲基化所导致,从表观遗传学(主要是DNA甲基化)对临床上L-DOPA治疗可能产生的多巴胺代谢紊乱及其不良反应做出了新的解释.
目的 探究左鏇多巴(L-3,4-dihydroxyphenylalanine,L-DOPA)對多巴胺代謝關鍵基因單胺氧化酶B(monoamine oxidase B,MAO-B)轉錄的影響及其錶觀遺傳學調控機製.方法 以人神經母細胞瘤SH-SY5Y細胞作為研究對象,應用基因組甲基化定量試劑盒檢測L-DOPA對基因組甲基化的影響;採用半定量RT-PCR方法探究L-DOPA和DNA甲基轉移酶抑製劑5-氮雜-2'-脫氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)對MAO-B轉錄的影響;應用甲基化特異性PCR(methylation specific PCR,MSP)技術檢測L-DOPA對MAO-B基因啟動子區CpG島甲基化程度的影響.結果 ①L-DOPA(2μmol/L和20μmol/L)和50 μmol/L 5-aza-dC處理SH-SY5Y細胞24 h均會使其基因組甲基化降低.②L-DOPA(2μmol/L和20 μmol/L)處理SH-SY5Y細胞24 h會使MAO-BmRNA下調,而多巴脫羧酶(DOPA-decarboxylase,DDC)和兒茶酚胺氧位甲基轉移酶(eatechol-O-methyhransferase,COMT)轉錄無明顯變化.③不同濃度5-aza-dC(0、50、100和150 μmol/L)處理細胞24 h,MAO-B mRNA錶達明顯上調,DDC和COMT轉錄無明顯變化,提示MAO-B可能受到DNA甲基化調控.④L-DOPA處理可使MAO-B基因啟動子區CpG島甲基化升高,而5-aza-dC可使該區域CpG島甲基化降低,說明該區域甲基化受L-DOPA影響而升高,併可能是MAO-B基因轉錄活性下調的原因.結論 L-DOPA可能對MAO-B基因的轉錄活性有抑製作用,且可能是通過L-DOPA誘導的高CpG甲基化所導緻,從錶觀遺傳學(主要是DNA甲基化)對臨床上L-DOPA治療可能產生的多巴胺代謝紊亂及其不良反應做齣瞭新的解釋.
목적 탐구좌선다파(L-3,4-dihydroxyphenylalanine,L-DOPA)대다파알대사관건기인단알양화매B(monoamine oxidase B,MAO-B)전록적영향급기표관유전학조공궤제.방법 이인신경모세포류SH-SY5Y세포작위연구대상,응용기인조갑기화정량시제합검측L-DOPA대기인조갑기화적영향;채용반정량RT-PCR방법탐구L-DOPA화DNA갑기전이매억제제5-담잡-2'-탈양포감(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)대MAO-B전록적영향;응용갑기화특이성PCR(methylation specific PCR,MSP)기술검측L-DOPA대MAO-B기인계동자구CpG도갑기화정도적영향.결과 ①L-DOPA(2μmol/L화20μmol/L)화50 μmol/L 5-aza-dC처리SH-SY5Y세포24 h균회사기기인조갑기화강저.②L-DOPA(2μmol/L화20 μmol/L)처리SH-SY5Y세포24 h회사MAO-BmRNA하조,이다파탈최매(DOPA-decarboxylase,DDC)화인다분알양위갑기전이매(eatechol-O-methyhransferase,COMT)전록무명현변화.③불동농도5-aza-dC(0、50、100화150 μmol/L)처리세포24 h,MAO-B mRNA표체명현상조,DDC화COMT전록무명현변화,제시MAO-B가능수도DNA갑기화조공.④L-DOPA처리가사MAO-B기인계동자구CpG도갑기화승고,이5-aza-dC가사해구역CpG도갑기화강저,설명해구역갑기화수L-DOPA영향이승고,병가능시MAO-B기인전록활성하조적원인.결론 L-DOPA가능대MAO-B기인적전록활성유억제작용,차가능시통과L-DOPA유도적고CpG갑기화소도치,종표관유전학(주요시DNA갑기화)대림상상L-DOPA치료가능산생적다파알대사문란급기불량반응주출료신적해석.
