宁夏医科大学学报
寧夏醫科大學學報
저하의과대학학보
Journal of Ningxia Medical University
2015年
9期
1000-1003,1012,封2
,共6页
赵薇%董晓薇%舒震%徐玉金%张伟
趙薇%董曉薇%舒震%徐玉金%張偉
조미%동효미%서진%서옥금%장위
类风湿关节炎%滑膜成纤维细胞%盘状结构域受体2%相互作用蛋白
類風濕關節炎%滑膜成纖維細胞%盤狀結構域受體2%相互作用蛋白
류풍습관절염%활막성섬유세포%반상결구역수체2%상호작용단백
rheumatoid arthritis%fibroblast-like synoviocytes%discoidin domain receptors 2%interacting proteins
目的 筛选盘状结构域受体(discoidin domain receptors 2,DDR2)的相互作用蛋白.方法 原代培养类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs).用人DDR2过表达腺病毒(Ad5-DDR2)感染FLSs,上调DDR2的表达.采用Ⅱ型胶原诱导的方法活化FLSs细胞膜上的DDR2;提取细胞总蛋白,通过小鼠来源的DDR2抗体免疫沉淀FLSs中的DDR2蛋白复合物;双向电泳分离抗原抗体复合物,质谱分析确认DDR2活化前后的差异蛋白.结果 Ad5-DDR2感染RA FLSs后,Western-blot结果显示细胞中DDR2表达水平显著上调.双向电泳分离DDR2免疫沉淀复合物,考马斯亮蓝染色显示胶原刺激前后,DDR2免疫复合物存在7个差异蛋白点.质谱分析及生物信息学分析显示,DDR2相互作用蛋白主要包括波形蛋白(vimentin)、膜脂联蛋白A2(Annexin A2)、免疫球蛋白和肌动蛋白等.结论 筛选获得了两个可能与RA病程相关的DDR2相互作用蛋白——波形蛋白和膜脂联蛋白2,为DDR2-MMPs通路作用机制的阐明奠定了基础.
目的 篩選盤狀結構域受體(discoidin domain receptors 2,DDR2)的相互作用蛋白.方法 原代培養類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis,RA)成纖維樣滑膜細胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs).用人DDR2過錶達腺病毒(Ad5-DDR2)感染FLSs,上調DDR2的錶達.採用Ⅱ型膠原誘導的方法活化FLSs細胞膜上的DDR2;提取細胞總蛋白,通過小鼠來源的DDR2抗體免疫沉澱FLSs中的DDR2蛋白複閤物;雙嚮電泳分離抗原抗體複閤物,質譜分析確認DDR2活化前後的差異蛋白.結果 Ad5-DDR2感染RA FLSs後,Western-blot結果顯示細胞中DDR2錶達水平顯著上調.雙嚮電泳分離DDR2免疫沉澱複閤物,攷馬斯亮藍染色顯示膠原刺激前後,DDR2免疫複閤物存在7箇差異蛋白點.質譜分析及生物信息學分析顯示,DDR2相互作用蛋白主要包括波形蛋白(vimentin)、膜脂聯蛋白A2(Annexin A2)、免疫毬蛋白和肌動蛋白等.結論 篩選穫得瞭兩箇可能與RA病程相關的DDR2相互作用蛋白——波形蛋白和膜脂聯蛋白2,為DDR2-MMPs通路作用機製的闡明奠定瞭基礎.
목적 사선반상결구역수체(discoidin domain receptors 2,DDR2)적상호작용단백.방법 원대배양류풍습성관절염(rheumatoid arthritis,RA)성섬유양활막세포(fibroblast-like synoviocytes,FLSs).용인DDR2과표체선병독(Ad5-DDR2)감염FLSs,상조DDR2적표체.채용Ⅱ형효원유도적방법활화FLSs세포막상적DDR2;제취세포총단백,통과소서래원적DDR2항체면역침정FLSs중적DDR2단백복합물;쌍향전영분리항원항체복합물,질보분석학인DDR2활화전후적차이단백.결과 Ad5-DDR2감염RA FLSs후,Western-blot결과현시세포중DDR2표체수평현저상조.쌍향전영분리DDR2면역침정복합물,고마사량람염색현시효원자격전후,DDR2면역복합물존재7개차이단백점.질보분석급생물신식학분석현시,DDR2상호작용단백주요포괄파형단백(vimentin)、막지련단백A2(Annexin A2)、면역구단백화기동단백등.결론 사선획득료량개가능여RA병정상관적DDR2상호작용단백——파형단백화막지련단백2,위DDR2-MMPs통로작용궤제적천명전정료기출.
