中华绒螯蟹△9脂肪酸去饱和酶基因克隆与原核表达
중화융오해△9지방산거포화매기인극륭여원핵표체
Prokaryotic expression of fatty acyl-CoA △9 desaturase in Eriocheir sinensis
  • 万方数据
    中国水产科学 중국수산과학
    Journal of Fishery Sciences of China
    2015年 6期 1177-1185 ,共9页

    姚琴琴%杨志刚%郭子好%成永旭%王瑶%施秋燕%刘启彬%何杰%杨筱珍

    요금금%양지강%곽자호%성영욱%왕요%시추연%류계빈%하걸%양소진

    中华绒螯蟹%△9脂肪酸去饱和酶%克隆%原核表达 中華絨螯蟹%△9脂肪痠去飽和酶%剋隆%原覈錶達
    중화융오해%△9지방산거포화매%극륭%원핵표체
    Eriocheir sinensis%fatty acyl-CoA △9 desaturase%clone%prokaryotic expression
    根据中华绒螯蟹FAD9基因cDNA序列(Accession Number: JQ693685)设计引物,扩增得到中华绒螯蟹FAD9基因的开放阅读框(ORF),用原核表达载体pCold-TF DNA成功构建重组表达载体pCold-fad9,将pCold-fad9转入大肠杆菌BL21 (DE3)pLysS,在异丙-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下进行表达.SDS-PAGE分析表明,诱导后出现的特异性蛋白条带,大小与预期理论值(95.10 kD)相符.当IPTG浓度为0.3 mmol/L时,在15℃条件下诱导20 h,重组蛋白的表达量最高.目的蛋白主要存在于上清溶液中,为可溶性表达.利用镍离子亲和层析柱对重组蛋白进行了纯化,用Western-blotting方法验证了该重组蛋白可以与anti-His抗体特异性结合.研究结果为中华绒螯蟹FAD9重组蛋白的大量纯化及活性检测奠定基础,也为今后进一步开展脂肪酸去饱和酶功能的研究提供参考.
    근거중화융오해FAD9기인cDNA서렬(Accession Number: JQ693685)설계인물,확증득도중화융오해FAD9기인적개방열독광(ORF),용원핵표체재체pCold-TF DNA성공구건중조표체재체pCold-fad9,장pCold-fad9전입대장간균BL21 (DE3)pLysS,재이병-D-류대반유당감(IPTG)적유도하진행표체.SDS-PAGE분석표명,유도후출현적특이성단백조대,대소여예기이론치(95.10 kD)상부.당IPTG농도위0.3 mmol/L시,재15℃조건하유도20 h,중조단백적표체량최고.목적단백주요존재우상청용액중,위가용성표체.이용얼리자친화층석주대중조단백진행료순화,용Western-blotting방법험증료해중조단백가이여anti-His항체특이성결합.연구결과위중화융오해FAD9중조단백적대량순화급활성검측전정기출,야위금후진일보개전지방산거포화매공능적연구제공삼고.
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