创伤外科杂志
創傷外科雜誌
창상외과잡지
Journal of Traumatic Surgery
2015年
6期
546-549
,共4页
佘飞%苏琴%张宪%孙本强%贾晓颖%赵晓东%张华
佘飛%囌琴%張憲%孫本彊%賈曉穎%趙曉東%張華
사비%소금%장헌%손본강%가효영%조효동%장화
脊髓损伤%神经%细胞%蛋白%小鼠
脊髓損傷%神經%細胞%蛋白%小鼠
척수손상%신경%세포%단백%소서
spinal cord injury%neuron%cells%protein%rats
目的 验证小鼠损伤脊髓中高表达的microRNA-21(miR-21)在neuro-2a细胞中对程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的作用,初步探讨miR-21在脊髓损伤过程中的作用.方法 将neuro-2a细胞在体外培养16h,分别按相应体系转染miR-21 mimics,继续培养48h,提取6孔板内细胞总蛋白和总RNA行蛋白印记和实时定量PCR检测,利用HEK293细胞行荧光素酶报告基因检测.结果 neuro-2a细胞转染miR-21 mimics后,其内源性程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的表达在蛋白和mRNA水平均明显降低.双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-21对PDCD4 3'非翻译区(3'-UTR)的预测位点有直接抑制作用,而将此位点突变后,miR-21对PDCD4 3'-UTR预测位点的抑制作用消失.结论 miR-21通过直接作用于PDCD4 3'-UTR靶位点从而在mRNA和蛋白水平抑制PDCD4的表达.miR-21可能在脊髓损伤过程中具有重要的保护作用.
目的 驗證小鼠損傷脊髓中高錶達的microRNA-21(miR-21)在neuro-2a細胞中對程序性細胞死亡因子4(PDCD4)的作用,初步探討miR-21在脊髓損傷過程中的作用.方法 將neuro-2a細胞在體外培養16h,分彆按相應體繫轉染miR-21 mimics,繼續培養48h,提取6孔闆內細胞總蛋白和總RNA行蛋白印記和實時定量PCR檢測,利用HEK293細胞行熒光素酶報告基因檢測.結果 neuro-2a細胞轉染miR-21 mimics後,其內源性程序性細胞死亡因子4(PDCD4)的錶達在蛋白和mRNA水平均明顯降低.雙熒光素酶報告基因檢測結果顯示,miR-21對PDCD4 3'非翻譯區(3'-UTR)的預測位點有直接抑製作用,而將此位點突變後,miR-21對PDCD4 3'-UTR預測位點的抑製作用消失.結論 miR-21通過直接作用于PDCD4 3'-UTR靶位點從而在mRNA和蛋白水平抑製PDCD4的錶達.miR-21可能在脊髓損傷過程中具有重要的保護作用.
목적 험증소서손상척수중고표체적microRNA-21(miR-21)재neuro-2a세포중대정서성세포사망인자4(PDCD4)적작용,초보탐토miR-21재척수손상과정중적작용.방법 장neuro-2a세포재체외배양16h,분별안상응체계전염miR-21 mimics,계속배양48h,제취6공판내세포총단백화총RNA행단백인기화실시정량PCR검측,이용HEK293세포행형광소매보고기인검측.결과 neuro-2a세포전염miR-21 mimics후,기내원성정서성세포사망인자4(PDCD4)적표체재단백화mRNA수평균명현강저.쌍형광소매보고기인검측결과현시,miR-21대PDCD4 3'비번역구(3'-UTR)적예측위점유직접억제작용,이장차위점돌변후,miR-21대PDCD4 3'-UTR예측위점적억제작용소실.결론 miR-21통과직접작용우PDCD4 3'-UTR파위점종이재mRNA화단백수평억제PDCD4적표체.miR-21가능재척수손상과정중구유중요적보호작용.
