CAJ | 학술논문

目的观察脐血源单核细胞分化为树突状细胞(DC)的过程中,核转录因子-kB p65(NF-kB p65)的表达以及GPS对单核细胞分化为DC的影响.方法无菌条件下采集脐血,非连续密度梯度离心获取脐血单核细胞;用含粒单细胞刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)、脂多糖(LPS)和GPS的RPMI-1640培养液分别对细胞因子组、GPS组、联合培养组的单核细胞进行体外培养;应用倒置相差显微镜、瑞氏染色和CD86、CD83、HLA-DR、S-100的免疫细胞化学法鉴定单核细胞和DC.动态观察单核细胞分化为DC过程中不同时间点的NF-kB p65的表达,并进行图像和SPSS软件分析.结果 CD86、CD83、HLA-DR、S-100的免疫细胞化学法证实所获单核细胞和DC符合各自的形态和表型特征.在含GM-CSF和IL-4的RPMI-1640培养液培养7d时,单核细胞分化成未成熟DC(imDC);在含GM-CSF、IL-4和LPS的RPMI-1640培养液继续培养5d时,im-DC分化为成熟DC(mDC),两者的细胞核内NF-kB p65表达具有显著性差异(P＜0.05).单纯用只合GPS的RPMI-1640培养液培养单核细胞至7d时,可见其细胞核呈NF-kBp65阳性,已分化为imDC,继续培养5d,则分化为DC.用含GM-CSF、IL-4和甘草多糖的RPMI-1640培养液联合培养7d时,则该单核细胞分化为imDC;加入LPS后继续培养5d,imDC的细胞核呈NF-kBp65强阳性,免疫细胞化学法证实imDC已经分化为DC.联合培养组细胞的表型表达均强于细胞因子组和GPS组(P＜0.05).结论脐血来源单核细胞分化为imDC和mDC过程中,细胞核内NF-kB p65表达逐渐增强.单纯用GPS(400μg/mL)可以刺激单核细胞分化为imDC和mDC,效果逊于细胞因子GM-CSF、IL-4和LPS共同培养.
목적 관찰제혈원단핵세포분화위수돌상세포(DC)적과정중,핵전록인자-kB p65(NF-kB p65)적표체이급GPS대단핵세포분화위DC적영향.방법 무균조건하채집제혈,비련속밀도제도리심획취제혈단핵세포;용함립단세포자격인자(GM-CSF)、백개소-4(IL-4)、지다당(LPS)화GPS적RPMI-1640배양액분별대세포인자조、GPS조、연합배양조적단핵세포진행체외배양;응용도치상차현미경、서씨염색화CD86、CD83、HLA-DR、S-100적면역세포화학법감정단핵세포화DC.동태관찰단핵세포분화위DC과정중불동시간점적NF-kB p65적표체,병진행도상화SPSS연건분석.결과 CD86、CD83、HLA-DR、S-100적면역세포화학법증실소획단핵세포화DC부합각자적형태화표형특정.재함GM-CSF화IL-4적RPMI-1640배양액배양7d시,단핵세포분화성미성숙DC(imDC);재함GM-CSF、IL-4화LPS적RPMI-1640배양액계속배양5d시,im-DC분화위성숙DC(mDC),량자적세포핵내NF-kB p65표체구유현저성차이(P＜0.05).단순용지합GPS적RPMI-1640배양액배양단핵세포지7d시,가견기세포핵정NF-kBp65양성,이분화위imDC,계속배양5d,칙분화위DC.용함GM-CSF、IL-4화감초다당적RPMI-1640배양액연합배양7d시,칙해단핵세포분화위imDC;가입LPS후계속배양5d,imDC적세포핵정NF-kBp65강양성,면역세포화학법증실imDC이경분화위DC.연합배양조세포적표형표체균강우세포인자조화GPS조(P＜0.05).결론 제혈래원단핵세포분화위imDC화mDC과정중,세포핵내NF-kB p65표체축점증강.단순용GPS(400μg/mL)가이자격단핵세포분화위imDC화mDC,효과손우세포인자GM-CSF、IL-4화LPS공동배양.